Синтез mRNA in vitro
Головні компоненти mRNA - це 5'-кап, 5'-UTR, відкритий читальний рамка (ORF), 3'-UTR та полі-A хвіст, які є необхідними для збереження функціональності mRNA. Дослідники використовували різні методи для ідентифікації та оптимізації послідовностей та структур mRNA.
Синтез mRNA виконується на основі транскрипції in vitro (IVT) за допомогою лінійних ДНК-шаблонів, РНК-полімераз (T3, T7 або SP6), незмінених або модифікованих нуклеотидів, ензимів та відповідних реагентів.
модифікація 5'-кап
Послідовності зрілого mRNA від еукариотичної клітини мають капсу 7-метилгуанозину (m7G) на 5' кінці, що покращує стійкість mRNA та ефективність перекладу. Існує два загальних методи захоплення mRNA in vitro. По-перше, mRNA може бути капсований разом із in vitro транскриптом шляхом додавання капсу-аналога структури m7GpppG (наприклад, CleanCap) до системи IVT. Цей ко-транскрипційний метод капсування забезпечує природну 5' капсову структуру та збільшує ефективність капсування до майже 90-99%. По-друге, карта mRNA також може бути отримана шляхом ферментних реакцій після реакції in vitro транскрипції.
Модифікація PolyA
Полі(A) хвіст також продовжує півжиток mRNA в vivo та покращує ефективність перекладу mRNA. Довжина сприймленого полі(A) хвоста повинна бути 100-300 нуклеотидів. Крім того, модифікована аденинова кислота збільшує стійкість полі A хвоста проти деградації клітинним RNase. Полі A хвост може бути вставлений шляхом транскрипції in vitro за допомогою ДНК-шаблону, що кодує полі A, таким чином, отримуючи конкретну довжину послідовності полі A. Також можна використовувати рекомбінантну полі A полімеразу для ензимної поліаденілації після транскрипції mRNA.
Модифікація нуклеотидів
Модифіковані нуклеозиди можуть тормозити розпізнавання і/або активацію рецепторів розпізнавання патернів (PRR) та покращувати ефективність вакцин mRNA двома повністю різними способами. Додавання деяких хімічно модифікованих нуклеозидів, включаючи псевдouriidine (ψ), 1-метилпсевдouriidine (m1ψ), tiouriidine (s4U) та 5-метилцитозин (m5C), може запобігти активації TLR7/8 та інших рецепторів вродженої імунної системи, що значно зменшує імуногенність mRNA.
система доставки mRNA
Щоб забезпечити функціонування mRNA, необхідно, щоб вона потрапляла до цитоплазми господаря та виражала специфічні антигени. Одним із найскладніших викликів для mRNA-вакцин та терапевтичних засобів є доставка mRNA до цільових клітин з достатньо високими рівнями трансляції, що вимагає дуже спеціфічних та ефективних систем доставки mRNA. Було розроблено кілька векторів доставки mRNA, включаючи дендритні клітини (DCs), протамін, катіонні полімери та катіонні ліпосоми.
Комплекси катіонних ліпідів з mRNA та іншими препаратами можуть утворювати наночастинки розміром 80-200 нм, які називаються ліпідними наночастинками (LNPs). Як одна з найбільш сучасних систем доставки mRNA, LNP містить іонізовані катіонні ліпіди, природні фосфоліпіди, холестерин та поліетиленгліколь (PEG). Низка вакцин на основі RNA та терапевтичних застосувань (siRNA та mRNA), що були затверджені Управлінням з контролю їжі та лікарських засобів США, базуються на системах доставки LNP.
Yaohai Bio-Pharma Пропонує Комплексне Рішення для RNA
Замовні Постачання
|
Клас
|
Результати виконання
|
Специфікація
|
Заявки
|
|
не-GMP
|
Лікарська речовина, mRNA
|
0.1~10 мг (мРНК)
|
Доклінічні дослідження, такі як трансфекція клітин, розробка аналітичних методів, доствабильні дослідження, розробка формул
|
|
Лікарський продукт, ЛНП-мРНК
|
|
GMP, Стерильність
|
Лікарська речовина, mRNA
|
10 мг~70 г
|
Заявка на дослідницьке нове лікиво (IND), Авторизація клінічних досліджень (CTA), Забезпечення клінічними випробуваннями, Заявка на ліцензію біологічного продукту (BLA), Комерційне забезпечення
|
|
Лікарський продукт, ЛНП-мРНК
|
5000 шприців або наповнених шприців/картриджів
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
