فن آوری های درگیر در سنتز mRNA

شرط

سنتز in vitro mRNA

اجزای اصلی mRNA عبارتند از 5'-cap، 5'-UTR، قاب خواندن باز (ORF)، 5'-UTR و 5' poly A tail که برای حفظ عملکرد mRNA ضروری هستند. محققان از روش های مختلفی برای شناسایی و بهینه سازی توالی ها و ساختارهای mRNA استفاده کرده اند.

سنتز mRNA بر اساس رونوشت in vitro (IVT) با استفاده از الگوهای DNA خطی، RNA پلیمرازها (T3، T7 یا SP6)، نوکلئوتیدهای اصلاح نشده یا اصلاح شده، آنزیم ها و معرف های مناسب انجام می شود.

5' تغییر کلاه

توالی‌های mRNA بالغ از یوکاریوسیت یک کلاهک ۷ متیل گوانوزین (m7G) را در انتهای ۵ دقیقه نشان می‌دهند که پایداری mRNA و کارایی ترجمه را بهبود می‌بخشد. دو روش کلی برای گرفتن mRNA در شرایط آزمایشگاهی وجود دارد. ابتدا، mRNA را می توان همراه با رونوشت in vitro با افزودن یک آنالوگ کلاهی از ساختار m7GpppG (به عنوان مثال، CleanCap) به سیستم IVT پوشاند. این روش رونویسی همزمان ساختار کپسول 5' طبیعی را فراهم می کند و راندمان درپوش را به 7-5٪ افزایش می دهد. ثانیا، نقشه برداری mRNA را می توان با نگاشت واکنش های آنزیمی به دنبال واکنش رونویسی در شرایط آزمایشگاهی نیز انجام داد.

اصلاح PolyA

دم Poly(A) همچنین نیمه عمر mRNA را در داخل بدن افزایش می دهد و کارایی ترجمه mRNA را بهبود می بخشد. طول دم پلی (A) تقویت شده باید 100-300 نوکلئوتید باشد. علاوه بر این، آدنوزین اصلاح شده پایداری دم پلی A را در برابر تخریب RNase سلولی افزایش می دهد. دم Poly A را می توان با رونویسی آزمایشگاهی با استفاده از الگوی DNA که پلی A را کد می کند وارد کرد و در نتیجه منجر به طول توالی پلی A خاص می شود. پلی مراز نوترکیب پلی A را می توان با پلی آدنیلاسیون آنزیمی پس از رونویسی mRNA نیز استفاده کرد.

اصلاح نوکلئوتیدها

نوکلئوزیدهای اصلاح‌شده می‌توانند از شناسایی و/یا فعال‌سازی گیرنده‌های تشخیص الگو (PRR) جلوگیری کنند و کارایی واکسن‌های mRNA را به دو روش کاملاً متفاوت افزایش دهند. افزودن نوکلئوزیدهای اصلاح شده شیمیایی از جمله پسودوریدین (ψ)، 1-متیل پسئودوریدین (m1ψ)، تیوریدین (s4U) و 5- متیل سیتوزین (m5C) می تواند از فعال شدن TLR7/8 و سایر گیرنده های ایمنی ذاتی جلوگیری کند که به طور قابل توجهی ایمنی زایی را کاهش می دهد. mRNA

سیستم تحویل mRNA

برای حفظ عملکرد mRNA، باید وارد سیتوپلاسم میزبان و بیان آنتی ژن های خاص شود. یکی از دشوارترین چالش‌های پیش روی واکسن‌ها و روش‌های درمانی mRNA در انتقال mRNA به سلول‌های هدف با سطوح ترجمه به اندازه کافی بالا است، زیرا به سیستم‌های تحویل mRNA بسیار خاص و کارآمد نیاز دارد. چندین ناقل تحویل mRNA توسعه یافته و مورد استفاده قرار گرفته‌اند، از جمله سلول‌های دندریتیک (DCs)، پروتامین، پلیمرهای کاتیونی و لیپوزوم‌های کاتیونی.

مجتمع‌های لیپیدهای کاتیونی با mRNA و سایر آماده‌سازی‌ها می‌توانند در مجموع نانوذراتی با اندازه ۸۰-۲۰۰ نانومتر به نام نانوذرات لیپیدی (LNPs) تشکیل دهند. به عنوان یکی از پیشرفته ترین سیستم های تحویل mRNA، LNP شامل لیپیدهای کاتیونی قابل یونیزاسیون، فسفولیپیدهای طبیعی، کلسترول و پلی اتیلن گلیکول (PEG) است. چندین واکسن و درمان RNA (siRNA و mRNA) تایید شده توسط سازمان غذا و داروی ایالات متحده بر اساس سیستم های تحویل LNP هستند.

Yaohai Bio-Pharma راه حل یک مرحله ای برای RNA ارائه می دهد

کاتالوگ محصولات RNA

کاتالوگ محصولات mRNA
کاتالوگ محصولات saRNA
کاتالوگ محصولات circRNA

سنتز RNA سفارشی

سنتز mRNA سفارشی
سنتز saRNA سفارشی
سنتز circRNA سفارشی

خدمات mRNA CDMO

توسعه فرایند
تولید GMP
Aseptic Fill and Finish
تجزیه و تحلیل و آزمایش

محصولات سفارشی

درجه	تحویل	مشخصات	اپلیکیشن‌ها
غیر GMP	ماده دارویی، mRNA	0.1 تا 10 میلی گرم (mRNA)	تحقیقات پیش بالینی مانند ترانسفکشن سلولی، توسعه روش تحلیلی، مطالعات پیش پایداری، توسعه فرمولاسیون
	محصول دارویی، LNP-mRNA
GMP، عقیمی	ماده دارویی، mRNA	10 میلی گرم تا 70 گرم	داروی جدید تحقیقاتی (IND)، مجوز کارآزمایی بالینی (CTA)، عرضه آزمایشات بالینی، درخواست مجوز بیولوژیک (BLA)، عرضه تجاری
	محصول دارویی، LNP-mRNA	5000 ویال یا سرنگ / کارتریج از پیش پر شده

همه دسته بندی ها

فن آوری های درگیر در سنتز mRNA

شرط