Технологии, используемые в синтезе мРНК

Модальность

Технологии, используемые в синтезе мРНК

Синтез мРНК in vitro

Основными компонентами мРНК являются 5'-кэп, 5'-UTR, открытая рамка считывания (ORF), 5'-UTR и 5'-полиА-хвост, которые необходимы для поддержания функции мРНК. Исследователи использовали различные методы для идентификации и оптимизации последовательностей и структур мРНК.

Синтез мРНК осуществляют на основе транскрипта in vitro (IVT) с использованием линейных ДНК-матриц, РНК-полимераз (Т3, Т7 или SP6), немодифицированных или модифицированных нуклеотидов, ферментов и соответствующих реагентов.

Модификация 5-футового колпачка

Последовательности зрелой мРНК эукариоцитов имеют кэп из 7-метилгуанозина (m7G) на 5'-конце, что улучшает стабильность мРНК и эффективность трансляции. Существует два основных метода захвата мРНК in vitro. Во-первых, мРНК можно кэпировать вместе с транскриптом in vitro, добавляя в систему IVT кэп-аналог структуры m7GpppG (например, CleanCap). Этот метод котранскрипционного кэпирования обеспечивает естественную структуру 5'-капсулы и повышает эффективность кэпирования почти до 90-99%. Во-вторых, картирование мРНК также можно выполнить путем картирования ферментативных реакций, следующих за реакцией транскрипции in vitro.

Модификация PolyA

Поли(А)-хвост также продлевает период полураспада мРНК in vivo и повышает эффективность трансляции мРНК. Длина амплифицированного поли(А)-хвоста должна составлять 100-300 нуклеотидов. Кроме того, модифицированный аденозин повышает устойчивость поли-А-хвоста против деградации клеточной РНКазы. Хвост поли А может быть вставлен посредством транскрипции in vitro с использованием матрицы ДНК, кодирующей поли А, что приводит к получению последовательности поли А определенной длины. Рекомбинантную полиА-полимеразу также можно использовать путем ферментативного полиаденилирования после транскрипции мРНК.

Модификация нуклеотидов

Модифицированные нуклеозиды могут ингибировать распознавание и/или активацию рецепторов распознавания образов (PRR) и повышать эффективность мРНК-вакцин двумя совершенно разными способами. добавление некоторых химически модифицированных нуклеозидов, в том числе псевдоуридина (ψ), 1-метилпсевдуридина (m1ψ), тиуридина (s4U) и 5-метилцитозина (m5C), может предотвратить активацию TLR7/8 и других рецепторов врожденного иммунитета, что значительно снижает иммуногенность. мРНК.

Система доставки мРНК

Для поддержания функции мРНК ей необходимо проникнуть в цитоплазму хозяина и экспрессировать специфические антигены. Одна из наиболее сложных задач, стоящих перед мРНК-вакцинами и терапевтическими средствами, заключается в доставке мРНК в клетки-мишени с достаточно высоким уровнем трансляции, поскольку для этого требуются высокоспецифичные и эффективные системы доставки мРНК. Было разработано и использовано несколько векторов доставки мРНК, включая дендритные клетки (ДК), протамин, катионные полимеры и катионные липосомы.

Комплексы катионных липидов с мРНК и другими препаратами могут вместе образовывать наночастицы размером 80-200 нм, называемые липидными наночастицами (ЛНЧ). Являясь одной из наиболее совершенных систем доставки мРНК, LNP включает ионизируемые катионные липиды, природные фосфолипиды, холестерин и полиэтиленгликоль (ПЭГ). Несколько РНК-вакцин и методов лечения (миРНК и мРНК), одобренных Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США, основаны на системах доставки ЛНП.

Yaohai Bio-Pharma предлагает универсальное решение для РНК

Каталог РНК-продуктов

Каталог продуктов мРНК
Каталог продуктов saRNA
Каталог продуктов циркРНК

Пользовательский синтез РНК

Синтез индивидуальной мРНК
Пользовательский синтез saRNA
Синтез индивидуальной циркРНК

Услуги мРНК CDMO

Развитие процесса
Производство GMP
Асептическое заполнение и отделка
Анализ и тестирование

Индивидуальные результаты

Класс	Результат	Спецификация	Приложения
не GMP	Лекарственное вещество, мРНК	0.1~10 мг (мРНК)	Доклинические исследования, такие как трансфекция клеток, разработка аналитических методов, предварительные исследования стабильности, разработка рецептур.
	Лекарственный препарат, ЛНП-мРНК
GMP, стерильность	Лекарственное вещество, мРНК	10 мг~70 г	Новый исследуемый препарат (IND), разрешение на клинические испытания (CTA), поставки для клинических испытаний, заявка на получение биологической лицензии (BLA), коммерческие поставки
	Лекарственный препарат, ЛНП-мРНК	5000 флаконов или предварительно заполненных шприцев/картриджей.

Все Категории

Технологии, используемые в синтезе мРНК

Модальность