Значение разработки последующих процессов (DSP)
Весь ферментационный бульон содержит целевой белок или плазмиду, а также примеси, связанные с продуктом и процессом, например, агрегаты, субстраты микробных клеток, белки клеток-хозяев (HCP), ДНК клеток-хозяев (HCD), эндотоксины и антибиотики.
Поэтому крайне важно разработать эффективный DSP, процесс очистки, позволяющий удалять определенные примеси и производить высокоочищенную и высококачественную лекарственную субстанцию. Кроме того, оптимизация процесса очистки может помочь повысить степень извлечения продукта, снизить затраты и улучшить масштабируемость и воспроизводимость процесса.
Ключевые слова: разработка процесса, оптимизация и валидация, процесс очистки, хроматография, удаление примесей, удаление HCP, удаление HCD, удаление эндотоксина, денатурация и рефолдинг белка, сборка VLP, конъюгация.
Применение: Биофармацевтическая промышленность, медицина человека, медицина для животных, вакцины, рекомбинантные крупномолекулярные биологические препараты, рекомбинантные биологические препараты, биологические реагенты.
Решения DSP компании Yaohai Bio-Pharma
Мы обладаем обширным опытом выделения целевых белков или плазмид из сложных матриц путем разработки и оптимизации последующего процесса очистки. Существуют различные типы единичных операций, подходящих для очистки биологических препаратов, включая центрифугирование, фильтрацию, гомогенизацию, щелочной лизис, ультрафильтрацию, осаждение, денатурацию и рефолдинг белков, хроматографию и т. д.
Наши доступные услуги по разработке систем очистки включают в себя:
- Разработка всего процесса очистки от сбора клеток или супернатанта до конечного активного ингредиента.
- Оптимизация процесса очистки на основе примесей, связанных с продуктом и процессом, для повышения качества и безопасности продукта, например, HCP, HCD, эндотоксина.
- Определение и оптимизация ключевых параметров в одной или нескольких единичных операциях, включая лизис клеток, тангенциальную поточную фильтрацию, скрининг смол, хроматографию, денатурацию и рефолдинг белков и т. д.
- Оптимизация процесса с точки зрения качества, выхода, извлечения, стоимости и масштабируемости.
- Валидация последующего процесса очистки.
- Оценка диапазона параметров на основе рисков и планирование экспериментов (DoE) при моделировании процессов.
Сервис Подробнее
Стандартизированные платформы очистки белков или плазмид основаны на нескольких стадиях грубой очистки и менее чем 4 стадиях хроматографии, включая захват, промежуточную очистку и доводку.
| Сервис Подробнее |
Операции подразделения |
параметры |
| Очистка сырой нефти |
центрифугирование |
Скорость вращения, время |
| Гомогенизация под высоким давлением |
Общее содержание твердых веществ, давление, циклы |
| Непрерывный щелочной лизис |
Соотношение ресуспендированных клеток и раствора для лизиса, время лизиса |
| Тангенциальная поточная фильтрация |
Материал мембраны и размер пор, скорость потока исходного материала, трансмембранное давление (TMP), отношение объема фильтрата к площади мембраны. |
| Атмосферные осадки |
Тип и концентрация осадителя, добавка, pH, температура, время |
| Денатурация и рефолдинг |
Солюбилизация белков телец включения |
Концентрация денатурирующего агента (например, мочевина, гуанидин HCl, сильноионное моющее средство), моющие средства (например, додецилсульфат натрия, SDS), восстановители (например, дитиотреитол, DTT), хелатирующие агенты (этилендиаминтетрауксусная кислота, ЭДТА), температура, время |
| Рефолдинг белка |
Методы рефолдинга (разбавление, диализ или рефолдинг SEC), концентрации белков, буферы, pH, температура, время, окислители и восстановители (например, глутатион, GSH/окисленный глутатион, GSSH, DTT/GSSH, цистеин/цистин), низкомолекулярные добавки (L-аргинин, мочевина, гуанидин/HCl и моющие средства) |
| Улавливание, промежуточная очистка и полировка |
AC (аффинная хроматография) |
Несколько типов хроматографической смолы/колонки (например, AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), длина и диаметр колонки, состав буфера, объем впрыска, состав подвижной фазы (адсорбция и десорбция), pH, скорость потока, связывание, Условия промывки и элюирования. |
| IEX (анионная или катионообменная хроматография) |
| HIC (хроматография гидрофобного взаимодействия) |
| Обессоливание и/или эксклюзионная хроматография (SEC) |
| RPC (обратно-фазовая хроматография) |
| ММС, смешанная хроматография |
Пример
Кейс 1
Нам поручено разработать и оптимизировать последующий процесс очистки, чтобы повысить чистоту белка с 85% до 90% при одновременном сокращении количества этапов хроматографии.
Компания Yaohai разработала надежный и масштабируемый процесс очистки с помощью трехступенчатой хроматографии для целевого белка — бактериальной аллергии. А конечная чистота достигала 3%.
Кейс 2
Наш клиент нанял Яохай для оптимизации процесса удаления эндотоксинов из вакцины, основанной на вирусоподобных частицах (VLP).
Наша команда провела оптимизацию параметров хроматографии и приготовила лекарственную субстанцию с чистотой 98% и остатком эндотоксина 12.8ЕЕ/мг.
Наш опыт
- Мы занимаемся разработкой и производством различных крупных молекул, включая рекомбинантные субъединичные вакцины, VLP, гормоны (инсулин, GLP-1, гормон роста), цитокины (интерлейкин-2/IL-2, IL-15, IL-21). ), факторы роста (EGF, FGF, NGF), нанотела/однодоменные антитела (sdAbs), ферменты и т. д.
Подобрать оборудование
Мы используем ведущие в отрасли системы AKTA Pure, AKTA Avant и препаративную ВЭЖХ для проведения различных методов хроматографии, включая аффинную, ионообменную, гидрофобное взаимодействие, обращенно-фазовую и эксклюзионную хроматографию.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕТ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
