Циркулярная mRNA (circRNA) широко применяется в исследовании функций генов или белков. Одновременно она популярна в разработке профилактических и терапевтических биопрепаратов, подобных mRNA.
Yaohai Bio-Pharma разработала комплекс технологий синтеза circRNA для предоставления высококачественной РНК, такой как проектирование и оптимизация последовательности, транскрипция in vitro (IVT), циклизация, очистка и инкапсуляция в липидные наночастицы (LNP). Все продукты выпускаются согласно строгим стандартам контроля качества (QC).
В сравнении с линейной мРНК, циркулярная РНК (circRNA) более устойчива в структуре и является главным направлением исследований в области нуклеинокислотных препаратов. Она имеет широкий спектр применения в различных областях, будь то кодирующая circRNA или некодирующая circRNA, включая профилактические вакцины против инфекционных заболеваний, терапевтические онкологические вакцины, терапевтические онкологические препараты, заместительную терапию белками, регенеративную медицину, клеточную и генную терапию (CGT), роль молекулярного спонжа и РНК-аптамера.
Процесс | Необязательные услуги | Детали услуги | Срок поставки (дни) |
проектирование и оптимизация последовательности circRNA | Проектирование и оптимизация кодирующих последовательностей | Оптимизация кодонов CDS | 1 |
Проектирование и оптимизация некодирующих последовательностей | Проектирование и оптимизация последовательностей интронов и экзонов, гомологичных рукавов и разделителей | 1-2 | |
Подготовка циркулярной плазмиды | Синтез генов | Синтез генов (Третья сторона) | 7-10 |
Усилитель плазмида | Усилитель плазмида | 2 | |
Извлечение плазмида | |||
Подготовка линейного плазмида | Линеаризация и очистка плазмид | Линеаризация плазмида | 1 |
Очистка ДНК после линеаризации | |||
Транскрипция in vitro и циклизация | Транскрипция in vitro и циклизация | Реакции транскрипции in vitro и циклизации | 1-2 |
Обработка RNase R | |||
Оптимизация - необязательная | Состав реакции, оптимизация времени | 2-5 | |
очистка circRNA | Традиционный метод очистки | Осадление хлоридом лития | 1 |
Очистка магнитными частицами | 1 | ||
Высокочистая очистка circRNA | Приготовительная высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) | 1-2 | |
Обмен буфера | Ультрафильтрация | 1 | |
лиофилизация circRNA | Заполнение образца | Наполнитель | 2-3 |
Лиофилизация | Предварительная заморозка | ||
Первичная сушка (сублимация) | |||
Вторичная сушка (десорбция) | |||
энкапсуляция circRNA-LNP | Энкапсуляция в ЛНП | Предварительная обработка материала и жидкости | 2 |
Смешивание в микротечном устройстве | |||
Обмен буфера | Касательное потоковое фильтрование | 1 | |
Стерилизация | Фильтрация | ||
Контроль качества плазмидной ДНК | Концентрация/чистота | Ультрафиолетовая (UV) спектрофотометрия | 1-2 |
Конформация плазмида | Агарозный Гель Электрофорез (AGE) | ||
Капиллярный электрофорез (CE) - опционально | |||
Идентификация плазмида | Идентификация рестрикционными энзимами/AGE | ||
Контроль качества circRNA | Концентрация/чистота | Ультрафиолетовая (UV) спектрофотометрия | - |
Чистота | Агарозный гель электрофорез (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
ВЭЖХ - опционально | 1 | ||
Контроль качества circRNA-LNP | Эффективность инкапсуляции | Метод RiboGreen | 1 |
Размер частиц | Динамическое светорассеяние (DLS) | 1 | |
Индекс полидисперсности | Динамическое светорассеяние (DLS) | 1 | |
Зета-потенциал | Динамическое светорассеяние (DLS) | 1 | |
Ассай активности на основе клеток | Трансфекция клеток | Посев клеток, трансфекция клеток | 4 |
Обнаружение целевого белка | Флуоресцентное наблюдение, западный блоттинг/ELISA | 1-3 |
Мы провели трансфекцию циркулярных РНК с усиленным зеленым флуоресцентным белком (eGFP circRNA), mCherry circRNA, люциферазной circRNA в клетки 293T и обнаружили целевой белок через флуоресценцию, световую или цветовую信号, западный блоттинг (WB), иммуноферментный анализ (ELISA).
Ассай активности циркулярных РНК на основе клеток от Yaohai Bio-Pharma