Подготовка циркРНК требует линейной РНК в качестве промежуточного материала (предшественника РНК) для циклизации, где предшественник РНК обычно готовится с использованием линеаризованной плазмидной ДНК в качестве транскрипционного шаблона и транскрибируется in vitro с помощью полимеразы T7 РНК.
Высококачественная плазмидная ДНК необходима для транскрипции in vitro (IVT). На основе зрелой платформы по подготовке плазмид Yaohai Bio-Pharma может предоставить услугу по приготовлению высокоочищенной и стандартизированной линеаризованной плазмидной ДНК (pDNA), чтобы обеспечить целостность продуктов IVT.
Детали услуг
| Процесс |
Необязательные услуги |
Детали услуги |
Срок доставки (рабочий день) |
| Подготовка циркулярной плазмиды |
Синтез генов |
Синтез генов (Третья сторона) |
7-10 |
| Усилитель плазмида |
Усилитель плазмида |
2 |
| Извлечение плазмида |
| Подготовка линейного плазмида |
Линеаризация и очистка плазмид |
Линеаризация плазмида |
1 |
| Очистка ДНК после линеаризации |
| Контроль качества плазмидной ДНК |
Концентрация и чистота |
Ультрафиолетовая (UV) спектрофотометрия |
1-2 |
| Конформация плазмида |
Агарозный Гель Электрофорез (AGE) |
| Капиллярный электрофорез (CE) - опционально |
| Идентификация плазмида |
Определение рестрикционных энзимов / AGE |
Наши особенности
- Шаблонная плазмида Freecut
Гибкий выбор методов линеаризации
- Высокая скорость восстановления
Оптимизация методов извлечения и очистки ДНК для достижения высокой скорости восстановления.
- Строгий контроль качества
Строгие стандарты контроля процесса, с коэффициентом суперспиралевого состояния исследовательских образцов плазмид более 80%.
- Зрелый платформенный процесс
Услуги по подготовке и контролю качества плазмид на высоком уровне и с высокой эффективностью для удовлетворения экспериментальных потребностей.
Изучение кейса
На примере продукта Yaohai Bio-Pharma mCherry circRNA, коэффициент суперспирали транскрипционных шаблонных плазмидных образцов (исследовательский уровень) превышает 70%, с линеаризацией близкой к 100%.
циркулярная РНК mCherry получается с использованием линеаризованного плазмида в качестве шаблона и трансфектируется в клетки 293T. Через 24 часа после трансфекции обнаруживается высокий уровень экспрессии флуоресценции (красная флуоресценция), который усиливается через 48 часов и может быть обнаружен на 7-й и 14-й день после трансфекции.
белок mCherry стабильно и эффективно экспрессируется, а чистота транскрипционного шаблона соответствует требованиям для высокоэффективного циркулярного препарата РНК (DP).
Валидация ин vitro экспрессии mCherry circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
