mRNA широко используется в исследовании функций генов или белков. Одновременно оно является распространенным в разработке профилактических и терапевтических биологических препаратов. Как общая стратегия синтеза молекул РНК, транскрипция in vitro (IVT) позволяет нам эффективно получать индивидуальные транскрипты.
Yaohai Bio-Pharma разработала ряд технологий синтеза mRNA для предоставления высококачественной РНК, такой как проектирование и оптимизация последовательности, IVT, очистка, лиофилизация и оболочка липидными наночастицами (LNP). Все продукты выпускаются при строгих стандартах контроля качества (QC).
С началом пандемии COVID-19 в 2020 году технология мРНК сделала огромный шаг вперед, и связанные с ней исследования и приложения получили беспрецедентное развитие, включая профилактические вакцины для предотвращения инфекционных заболеваний, терапевтические онкологические вакцины и препараты, лечение опухолей, заместительная терапия белками, регенеративная медицина и клеточная и генная терапия (CGT).
вакцина на основе mRNA | терапевтическая мРНК |
|
Процесс | Необязательные услуги | Детали услуги | Срок доставки (рабочий день) | Результат работы |
проектирование и оптимизация последовательности мРНК | Проектирование и оптимизация кодирующих последовательностей | Проектирование последовательности КДС и оптимизация кодонов | 1-3 | Файл последовательности |
Проектирование и оптимизация некодирующих последовательностей | Проектирование и оптимизация UTR, полияденированных последовательностей | |||
Подготовка плазмидного транскрипционного шаблона | Подготовка рекомбинантных плазмид | Синтез генов | 7-10 | |
Усилительная и экстракция плазмид | 4 | |||
Линеаризация и очистка плазмид | ||||
транскрипция mRNA in vitro | Ко-транскрипционное закрытие (однометодный метод) | Транскрипция in vitro (IVT) / Аналог колпачка | 1-2 | Н/Д |
Модификации нуклеотидов (модификации UTP/CTP) | ||||
Удаление шаблона ДНК (ДНаза I) | ||||
Энзиматическое закрытие (двухшаговый процесс) | IVT | 2-3 | ||
Модификации нуклеотидов (модификации UTP/CTP) | ||||
Удаление шаблона ДНК (ДНаза I) | ||||
очистка mRNA (хлорид лития/магнитные частицы) | ||||
Энзиматическое закрытие | ||||
очистка mRNA | Традиционная схема очистки | Осадление хлоридом лития | 1 | лекарственная форма mRNA |
Очистка магнитными частицами | ||||
Схема очистки на хроматографической колонке | Комбинация нескольких методов хроматографии | 1-2 | ||
Обмен буфера | Ультрафильтрация | 1 | ||
лиофилизация mRNA | Лиофилизация | Предварительная заморозка | 2-3 | лиофилизированный порошок mRNA |
Первичная сушка (сублимация) | ||||
Вторичная сушка (десорбция) | ||||
энкапсуляция mRNA | Энкапсуляция в ЛНП | Энкапсуляция в ЛНП | 2-3 | препарат mRNA-LNP |
Концентрация и обмен буфера | ||||
анализ качества mRNA | вещество лекарственного препарата mRNA / лиофилизированный порошок | Концентрация, чистота | 1 | Отчет о тестировании |
Целостность, эффективность закрытия, распределение хвоста polyA | 2-5 | |||
лекарственный препарат mRNA-LNP | Эффективность инкапсуляции | 1 | ||
Размер частиц и их распределение | ||||
Поверхностный заряд | ||||
подтверждение экспрессии mRNA | оценка клеток 293T | Посев клеток | 4 | |
Временная трансфекция клеток | ||||
Наблюдение флуоресцентного сигнала | 1-3 | |||
Западный блот (WB) / Иммуноферментный анализ (ELISA) |
крышка 5' |
▪ Без крышки ▪ Cap0, ко-крышка ▪ Cap1, ко-крышка ▪ Cap1, ферментативное закрытие |
5' UTR/3' UTR |
▪ Природная последовательность UTR ▪ Мутантная/Инженерная последовательность UTR |
3' Полиаденилатный хвост |
▪ Хвост из 100A ~120A (рекомендуемый) ▪ Сегментированный полиаденилатный хвост ▪ Другие пользовательские хвосты |
Модифицированные нуклеозиды |
▪ Немодифицированные основания ▪ Псевдouriдин (Ψ) ▪ N1-Метилпсевдouriidine (N1Ψ) ▪ 5-метилцитозин (m5C) ▪ 5-метилуридин (m5U) ▪ 5-метоксиуридин (5moU) ▪ 2-тиоуридин (s2U) ▪ 2′-O-метил-U ▪ Другие модификации |
Интегрированный сервисный поток
Предоставление комплексных услуг, начиная от дизайна последовательности на переднем крае до подготовки мРНК, контроля качества и валидации экспрессии на заднем.
Дизайн и оптимизация последовательности на уровне международного передового опыта
Профессиональное проектирование и оптимизация последовательности mRNA способствуют эффективному выражению mRNA.
Разнообразные модификации нуклеотидов
Эффективно увеличивают выражение mRNA и снижают неблагоприятные иммунные реакции на mRNA.
Зрелая платформа очистки
Сочетая традиционный метод очистки с саморазработанным, получают образцы mRNA высокой чистоты.
Полная платформа контроля качества
Увеличивают варианты контроля качества для соответствия требованиям рутинных тестов, таких как концентрация, чистота A260/280 и целостность, а также требованиям высокого контроля качества, таким как эффективность закрытия/распределение полия.
Быстрая доставка
Индивидуализированная mRNA может быть доставлена всего за 7 дней, за исключением внешнего синтеза последовательности.