Значение разработки процессов добычи и добычи
Восходящий процесс (USP), также известный как процесс ферментации, является одним из начальных этапов первичной биопереработки. Процесс микробной ферментации имеет решающее значение для культуры клеток высокой плотности и экспрессии экзогенных генов, что напрямую влияет на выход и стоимость биологических препаратов.
На ранних стадиях разработки биологических препаратов (доклиническая стадия или фаза 1/2) основное внимание уделяется разработке масштабируемых процессов без использования животных с промежуточным выходом и соблюдением всех стандартов качества продукции.
На поздних стадиях (этап 3 или коммерческий) мы сосредоточимся на производительности, надежности, масштабируемости и воспроизводимости, создавая экономически эффективный процесс. Действиями, направленными на решение этих проблем, являются исследования характеристик процесса и его валидации. При этом обычно применяются инструменты качества по дизайну (QbD) и планирования экспериментов (DoE).
Ключевые слова: разработка, оптимизация и валидация процесса, процесс ферментации, ферментация микробных клеток, бактериальная ферментация, дрожжевая ферментация, ферментация высокой плотности, ферментация инженерного штамма.
Применение: Биофармацевтическая промышленность, медицина человека, медицина для животных, вакцины, рекомбинантные крупномолекулярные биологические препараты, рекомбинантные биологические препараты, биологические реагенты.
Решения USP компании Yaohai Bio-Pharma
Опираясь на более чем 10-летний опыт микробной ферментации, компания Yaohai Bio-Pharma обладает опытом, позволяющим решать проблемы, связанные с процессом ферментации. Мы можем быстро разработать стратегии ферментации высокой плотности для Кишечная палочка (кишечная палочка) периплазматическая секреция, внутриклеточная экспрессия растворимых тел или телец включения и дрожжевая внеклеточная или внутриклеточная экспрессия.
Наши доступные услуги по разработке общей ферментации включают:
- Разработка процесса ферментации, выполненная в небольшом объеме 7 л в периодическом режиме с подпиткой.
- Проверка трехпартийного процесса в ферментерах емкостью 7 л
- Масштабирование промежуточного процесса до 30 л/70 л
Мы можем гибко выполнять многопараметрическую оптимизацию для достижения желаемой доходности или пропорции, используя однократный фактор (OTAF) или планирование экспериментов (DoE).
Ключевые параметры ферментации перечислены ниже:
Композиции ферментационных сред, не содержащих животных
Без антибиотиков или нет, объем инокулята
Температура роста, pH, уровень растворенного кислорода (DO)
Режим кормления (например, порционный)
Концентрация индуктора (например, IPTG, метанола), Точка индукции (влажная масса клеток/OD600),
Температура индукции, время индукции
и так далее
Сервис Подробнее
| Услуги |
Технологический процесс |
| Культивирование в шейкерной колбе (500 мл) |
Приготовление сред без животных → Культивирование микробных семян → Культивирование в шейкере → Индукция → Сбор урожая |
| Культивирование в ферментере (7 л) |
Приготовление сред без животных → Культивирование микробных семян → Ферментация клеток высокой плотности в биореакторе объемом 7 л → Индукция → Сбор урожая |
| Контроль качества белков/пептидов |
Предварительная обработка Внутриклеточная растворимая экспрессия: Сбор и ресуспендирование микробных клеток → Ультразвуковое дробление → Удаление остатков клеток → Неочищенный экстракт Экспрессия телец включения: Сбор и ресуспендирование микробных клеток → Ультразвуковое дробление → Подготовка телец включения → Неочищенный экстракт Внеклеточная растворимая экспрессия: Сбор культурального супернатанта → Концентрация и буфер обмен → Сырой экстракт Анализ качества Сырой экстракт в качестве образца → Анализ целевого белка с помощью SDS PAGE или Вестерн-блоттинга (ВБ) |
| Контроль качества плазмид |
Предварительная обработка и анализ качества Экстракция плазмиды → Анализ ДНК методом электрофореза в агарозном геле |
Пример
По заказу нашего клиента мы увеличили выход целевого полипептидного гормона с 8 г/л до 10 г/л.
Основываясь на полнофакторном дизайне и дизайне поверхности отклика в инструментах DoE, мы быстро распознали и оптимизировали ключевые параметры ферментации. В ходе оптимизированного процесса ферментации с высокой плотностью клеток уровень экспрессии увеличился до 10 г/л.
Наш опыт
- Мы работали над различными типами микробных хозяев, например, E.coli DH5α, ТОП10, Транс10, BL21; Пичия пасторис (P. пасторис) SMD1168H, X-33, GS115, штамм PichiaPink1/2/3/4; Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) и Хансенула полиморфная (H.polymorpha).
- Мы имеем опыт работы с E. палочки периплазматическая секреция, экспрессия растворимых телец и телец включения, а также дрожжевая внутриклеточная или внеклеточная экспрессия. Выход телец включения составляет до 10 г/л, а выход растворимого белка колеблется от 0.5 до 15 г/л.
- Мы занимаемся разработкой и производством различных крупных молекул, в том числе рекомбинантных субъединичных вакцин, вирусоподобных частиц (VLP), гормонов (инсулин, GLP-1, гормон роста), цитокинов (интерлейкин-2/IL-2, IL). -15, IL-21), факторы роста (EGF, FGF, NGF), нанотела/однодоменные антитела (sdAb), ферменты и т. д.
- Подобрать оборудование
Система ферментации 7л*16
Биоанализатор Cedex, Анализатор биопроцессов
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕТ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
