В рекомбинантных белках часто происходит окисление открытых боковых цепей аминокислот, таких как триптофан (Trp) и метионин (Met), что приводит к изменению физико-химических свойств белков. Эти изменения, в свою очередь, могут способствовать изменению биологических функций затронутых белков, таким как потеря связывания, снижение ферментативной активности, неожиданно быстрый клиренс. Белки являются важными мишенями для окислительных реакций, поскольку они быстро реагируют с окислителями и присутствуют в большом количестве в клетках, внеклеточных тканях и жидкостях организма.
Таким образом, мониторинг окисления белков имеет решающее значение для успешной биофармацевтической разработки.
Yaohai Bio-Pharma предлагает услуги анализа окисления аминокислот, которые позволяют определить окисление аминокислот методом жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС).
Мы участвовали в структурной характеристике белков различных крупных молекул, включая рекомбинантные субъединичные вакцины, нанотела/VHH/однодоменные антитела (sdAbs), фрагменты антител, гормоны/пептиды, цитокины, факторы роста (GF), ферменты, коллагены, и т. д.
Нормативные требования к окислению аминокислот
Согласно рекомендациям ICH Q6B, окисленные формы могут быть обнаружены и охарактеризованы хроматографическими, электрофоретическими и/или другими соответствующими аналитическими методами (например, высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ), капиллярным электрофорезом, масс-спектроскопией, круговым дихроизмом).
Аналитические методы
| Анализ |
методы |
| Окисление аминокислот |
ЖХ-МС, обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография (ОФ-ВЭЖХ) или хроматография гидрофобного взаимодействия. Высокоэффективная жидкостная хроматография (HIC-ВЭЖХ) и масс-спектрометрия. |
Аналитические процедуры
1. Подготовка образцов
2. ЖХ-МС
3. Анализ данных
Остатки триптофана (Trp) особенно склонны к окислению из-за высокой реакционной способности ароматического индола с активными формами кислорода. Окисление Trp требует некоторого обнажения остатков Trp, которые обычно скрыты в трехмерной структуре белка.
Однако когда остатки Trp окисляются, они могут превращаться во множество продуктов со свойствами, сильно отличающимися от исходного Trp. Наиболее распространенный путь окисления Trp включает образование N-формилкинуренина (разница масс: +32).
Другая часто окисляемая аминокислота — метионин. Атом серы в остатке Met может акцептировать либо один, либо два атома кислорода, что приводит к образованию сульфоксида (разница масс: +16) или сульфона (разница масс: +32) соответственно. Эта модификация относительно распространена из-за обычно высокого воздействия Met на поверхность.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕТ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
