Занятость N-гликозилируемых участков является физиологической особенностью гликопротеинов и в основном производит N-гликаны. Сервис анализа занятости N-гликозилируемых участков от Yaohai Bio-Pharma проводится через деградацию, высвобождение, обогащение и анализ с использованием жидкостной хроматографии-электросpray ионизации масс-спектрометрии-масс-спектрометрии (LC-ESI-MS/MS).
Мы принимали участие в характеристиках структуры белков различных крупных молекул, включая рекомбинантные субъединичные вакцины, нанотеллы/VHHs/однодоменные антитела (sdAbs), фрагменты антител, гормоны/пептиды, цитокины, факторы роста (GF), ферменты, коллагены и т.д.
Регуляторные требования к занятым N-гликозилируемым участкам
Согласно руководству ICH Q6B, «для гликопротеинов определяется углеводное содержание (нейтральные сахара, аминосахара и сиалиновые кислоты). Кроме того, структура углеводных цепей, паттерн олигосахаридов (антенарный профиль) и места гликозилирования полипептидной цепи анализируются настолько полно, насколько это возможно».
Аналитический метод
| Анализ |
Методы |
| Занятость места N-гликозилирования |
LC-MS после дегликозилирования и протеолитического расщепления |
Процедуры
1. Протеолиз белков для получения маленьких пептидных фрагментов.
2. Выделение N-гликанов с использованием эндогликозидазы H или PNGase F. Эндогликозидаза H разрывает связь между двумя остатками GlcNAc в ядре N-связанных гликанов, тогда как PNGase F — гликоамидаза, которая разрушает связь между GlcNAc и Asn, освобождая всю сахарную цепь и превращая Asn в Asp с увеличением массы на 1 да.
3. Обогащение N-гликопептидов с помощью ХПЖ (хроматография на основе гидрофильного взаимодействия)
4. Анализ степени оккупации N-связанных гликозилированных участков с использованием LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
