Данные картирования пептидов, полученные методом жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (LC-MS), предоставят большой объем информации о первичной и высших структурах природных и рекомбинантных белков, включая покрытие аминокислотной последовательности, посттрансляционные модификации (ПТМ, например, гликозилирование, окисление, деамидация), дисульфидные связи и т.д.
Yaohai Bio-Pharma предлагает услуги анализа картирования пептидов вашего целевого белка с помощью LC-MS для ускорения ваших исследований структуры белка.
Мы принимали участие в характеристиках структуры белков различных крупных молекул, включая рекомбинантные субъединичные вакцины, нанотеллы/VHHs/однодоменные антитела (sdAbs), фрагменты антител, гормоны/пептиды, цитокины, факторы роста (GF), ферменты, коллагены и т.д.
Регуляторные требования к картированию пептидов
Руководство ICHQ6B рекомендует: «Выборочное фрагментирование продукта на дискретные пептиды выполняется с использованием подходящих ферментов или химических веществ, а полученные пептидные фрагменты анализируются методом ХПВ или другой подходящей аналитической процедурой. Пептидные фрагменты следует идентифицировать по возможности с использованием таких техник, как анализ аминокислотного состава, секвенирование N-терминала или масс-спектрометрия (МС). Пептидное картирование действующего вещества или лекарственного препарата (ЛП) с использованием должным образом валидированного метода — это метод, часто используемый для подтверждения желаемой структуры продукта при выпуске партии».
Аналитические методы
| Анализ |
Методы |
| Картирование пептидов |
Протеолиз и жидкостная хроматография-масс-спектрометрия (ЖХ-МС) |
Аналитическая процедура
1. Редукция и алкилирование
Цель состоит в том, чтобы уменьшить мосты дисульфидов и заблокировать образующийся свободный тиол. Уменьшение мостов дисульфидов помогает открыть структуру белка, что делает протеолитическое расщепление более эффективным. Этот этап также разрушит мосты между цепями в случае многоцепочечных белков с дисульфидными связями, соединяющими цепи (например, моноклональные антитела, мАб).
2. Расщепление белка с использованием ферментов
Цель состоит в том, чтобы разложить белок на пептиды. Мы выбираем ферменты на основе теоретической последовательности белка и знаний о теоретическом расщеплении белка ферментами. Выбор ферментов таким образом должен привести к лучшему анализу пептидной картографии.
3. Анализ расщепленных пептидов Использование онлайн обратнофазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым (УФ) и электроиз 若要-масс-спектрометрическим обнаружением (ХЛВ/ЭИ-МС).
Разделение пептидов на основе полярности с помощью ХЛВ (обратная фаза-ХЛВ)
Пока пептид элюируется с колонки ЖХ, масс-спектрометр будет генерировать массовую информацию вместе с информацией о фрагмент-ионах, что позволяет нам определить последовательностную информацию. Мы используем эту последовательностную информацию для подтверждения идентичности пептида и предоставления первичной информации.
Мы также можем получать информацию о фрагментации пептидов при их входе в источник масс-спектрометра с колонки ЖХ. В зависимости от требований исследования, это либо селективный LC-MS/MS, либо неселективный, что может рассматриваться как форма тандемного МС.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
