Дезаминирование боковых цепей глутамина и аспарагина является распространенной модификацией с точки зрения влияния на свойства белковых биофармацевтических препаратов. Деамидирование может происходить в остатках глутамина, но обычно с гораздо меньшей скоростью. На скорость дезамидирования влияют температура, pH, локальная структура белка и фланкирующие аминоацильные остатки.
Yaohai BioPharma предлагает услугу тестирования на дезамидирование аминокислот, которая позволяет обнаружить дезамидирование аминокислот с помощью жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС).
Мы принимали участие в структурной характеристике белков различных крупных молекул, включая рекомбинантные субъединичные вакцины, нанотела/VHH/однодоменные антитела (sdAbs), фрагменты антител, гормоны/пептиды, цитокины, факторы роста (CF), ферменты, коллагены, и т. д.
Нормативные требования к дезамидированию аминокислот
Согласно рекомендациям ICH Q6B, дезамидированные формы могут быть обнаружены и охарактеризованы хроматографическими, электрофоретическими и/или другими соответствующими аналитическими методами.
Аналитические методы
| Анализ |
методы |
| Дезамидирование |
Жидкостная хроматография-масс-спектрометрия (ЖХ-МС) |
Процедуры
например, дезамидирование аспарагиновой кислоты
1. Ферментативное пищеварение
2. ЖХ-МС в условиях высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
3. Анализ данных
Дезаминирование аспарагина происходит через промежуточное соединение сукцинимида (Suc), которое подвержено рацемизации и гидролизу, с образованием четырех изомеров Asp, включая L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp и D-IsoAsp.
Теоретически при дезамидировании Gln могут образовываться четыре соответствующих изомера Glu посредством процесса, аналогичного дезамидированию Asn.
Масс-спектрометрия высокого разрешения легко определяет разницу масс в 1 Да между пептидами, содержащими Asn/Gln, и их соответствующими деамидированными аналогами Asp/Glu.
RU
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕТ
PL
PT
RO
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
