Значение анализа активности мРНК
В связи с быстрым развитием мРНК-вакцин и терапевтических средств необходима специальная группа методов анализа для проверки эффективности (определения их биологической активности), включая эффективность трансляции мРНК. Эти методы обычно основаны на трансфекции клеток и функциональных анализах целевого белка.
Yaohai Bio-Pharma предлагает клеточные анализы активности лекарственных веществ мРНК или продуктов LNP, включая трансфекцию клеток (клетки 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 и т. д.), а также анализы ELISA или вестерн-блоттинг (WB).
Нормативные требования к анализам эффективности
Согласно нормативным соображениям ВОЗ: «Эффективность каждой партии конечной вакцины должна определяться с использованием подходящего количественного и проверенного функционального метода(ов). Потенциальные анализы эффективности in vitro могут включать системы трансфекции на основе клеток или бесклеточные анализы». И USP рекомендовал «клеточный анализ» для проверки эффективности мРНК, то есть экспрессии целевого белка.
Процесс
Шаг 1. Трансфекция клеток мРНК или мРНК-ЛНЧ.
Клетки культивируют и трансфицируют мРНК или мРНК-ЛНЧ. Подробно, мРНК трансфицируется после смешивания с реагентом для трансфекции, тогда как мРНК-LNP трансфицируется непосредственно в клетки. Через 24-48 часов осветляют надосадочную жидкость, содержащую экспрессированный белок, центрифугированием.
Шаг 2. Функциональные анализы целевого белка.
Выполните анализы ELISA или WB для оценки функционального связывания целевых белков.
Кейсы
Клеточные анализы активности образцов мРНК
Компания Yaohai-BioPharma разработала метод клеточного анализа активности мРНК, включающий культуру клеток, трансфекцию клеток и функциональные анализы белков. Мы трансфицировали мРНК eGFP, мРНК mCherry, мРНК люциферазы, мРНК шиповидного белка в клетки 293T и обнаружили целевой белок с помощью флуоресценции, люминесцентного или цветного сигнала, WB, ELISA.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕТ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
