Что касается массового производства мРНК, транскрипция in vitro (IVT) является более эффективным и зрелым методом. В реакции IVT используется линеаризованная плазмидная ДНК, содержащая промотор Т7 в качестве матрицы, а мРНК синтезируется с использованием нуклеозидтрифосфатов (НТФ) в качестве субстратов в присутствии РНК-полимеразы Т7.
Модификация нуклеотидов — это прорыв в исследовании мРНК, когда немодифицированные молекулы мРНК распознаются внутриклеточными РНК-сенсорами и активируют врожденный иммунитет. С точки зрения иммуногенности и эффективности трансляции мРНК in vivo в процессе IVT обычно используются определенные виды модифицированных NTP, а распространенными модифицированными нуклеотидами являются псевдоуридин (Ψ), N1-метилпсевдуридин (N1Ψ) и 5-метилцитозин (5mC).
Процесс транскрипции мРНК in vitro
Схема реакции транскрипции in vitro (IVT)
Подробности об услугах
Дополнительная услуга |
Сервис Подробнее |
Срок доставки (рабочий день) |
Транскрипция in vitro (IVT) |
IVT, транскрипция in vitro |
1 |
| Нуклеотидные модификации (Ψ/N1Ψ/5mC и др.) |
| Удаление ДНК-матрицы (ДНаза I) |
Оптимизация состояния IVT – опционально |
Проектирование и оптимизация компонентов реакции IVT |
2-5 |
Наши функции
- Разнообразные стратегии модификации нуклеотидов
Улучшите стабильность мРНК и экспрессию белка in vivo.
- Строгий дизайн и оптимизация тестов
Можно получить фрагменты мРНК размером до 10 т.п.н.
За счет оптимизации условий реакции IVT скорость транскрипции достигает 1:200.
Строгий контроль РНКазы с помощью экспериментальной среды и расходных материалов может эффективно предотвратить деградацию мРНК.
Кейсы
Текущая система реакции IVT грубо оптимизирована для синтетических систем длиной около 100 нт, а не для мРНК произвольной длины. Чем длиннее последовательность мРНК, тем труднее ее транскрибировать и тем больше она склонна к деградации.
Чтобы подготовить индивидуальные последовательности мРНК длиной около 10 т.п.н., компания Yaohai Bio-Pharma успешно подготовила высококачественные образцы с высоким коэффициентом транскрипции 1:135 и получила 135 мкг изначально очищенных продуктов мРНК после 1 мкг линеаризованной плазмиды. транскрибировался in vitro посредством тщательного планирования эксперимента, постоянной оптимизации условий реакции и строгого контроля РНКазы.
Идентификация мРНК (электрофорез в агарозном геле)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕТ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
