Что касается периодического приготовления предшественников РНК, то обычно используемым методом является транскрипция in vitro (IVT). В реакции IVT используется линеаризованная плазмидная ДНК, содержащая промотор Т7 в качестве матрицы, и синтезируется предшественник РНК с нуклеозидтрифосфатами (NTP) в качестве субстрата в присутствии РНК-полимеразы Т7.
Методы циклизации in vitro включают химическое лигирование, ферментативное лигирование и метод перестановочных интрон-экзонов (PIE). Химическое лигирование и ферментативное лигирование подходят для циклизации более коротких РНК. Когда размер фрагмента превышает 100 нт, скорость циклизации сильно снижается. Напротив, нуклеазный метод, основанный на системе PIE, может обеспечить циклизацию последовательностей длиной 8 т.п.н.
Под катализом гуанозинтрифосфата (GTP) структура PIE подвергается циклизации внеинтронных последовательностей. В сочетании с разумной стратегией увеличения скорости циклизации Yaohai Bio-Pharma может достичь циклизации последовательностей длиной до 4 т.п.н. с эффективностью циклизации более 80%.
Реакция циклизации РНК in vitro протекает следующим образом:
Предшественник РНК синтезируется путем транскрипции in vitro, а компонент PIE завершает самосплайсинг под катализом GTP с образованием циркРНК.
Подробности об услугах
| Разработка |
Сервис Подробнее |
Срок доставки (рабочий день) |
| Транскрипция и циркуляция in vitro |
Подтверждение реакции системы |
1-2 |
| Реакции транскрипции и циклизации in vitro |
| Расщепление РНКазой R |
| Оптимизация реакции |
Состав реакции, оптимизация времени |
2-5 |
Наши функции
- Строгий дизайн тестов и оптимизация
Может быть достигнута циклизация РНК до 4 т.п.н.
- Высокая эффективность циклизации
Уровень циклизации более 80% может быть достигнут за счет рациональной стратегии оптимизации последовательности.
Благодаря строгому контролю РНКаз в экспериментальной среде и расходных материалах деградация РНК эффективно предотвращается.
Пример
Циклизация и обогащение циркРНК in vitro
На основе системы PIE компания Yaohai Bio-Pharma оптимизировала последовательность циклРНК со степенью циклизации более 80% с помощью электрофореза в агарозном геле (AGE). Результаты электрофореза в E-геле с использованием РНКазы R для обогащения циркРНК показывают, что линейный предшественник РНК переваривается, и после дальнейшей очистки большая часть разорванной циркРНК может быть удалена. Решение для очистки разработано компанией Yaohai Bio-Pharma.
Циркуляция in vitro и обогащение циркРНК
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕТ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
