Внеклеточный синтез mRNA
Основные компоненты mRNA включают 5'-кап, 5'-НCR, открытую рамку считывания (ORF), 3'-НCR и полимерный хвост A, которые необходимы для поддержания функции mRNA. Исследователи использовали различные методы для идентификации и оптимизации последовательностей и структур mRNA.
Синтез mRNA осуществляется на основе внеклеточной транскрипции (IVT) с использованием линейных ДНК-шаблонов, РНК-полимераз (T3, T7 или SP6), неизмененных или модифицированных нуклеотидов, ферментов и подходящих реактивов.
Модификация 5'-капа
Последовательности зрелой мРНК из эукариотической клетки демонстрируют 7-метилгуанозиновый (m7G) «кап» на 5' конце, что улучшает стабильность мРНК и эффективность трансляции. Существует два общих метода захвата мРНК in vitro. Во-первых, мРНК может быть закрыта капом вместе с транскриптом in vitro путем добавления аналога капа структуры m7GpppG (например, CleanCap) в систему IVT. Этот ко-транскрипционный метод капирования обеспечивает естественную 5'-капсульную структуру и увеличивает эффективность капирования до почти 90-99%. Во-вторых, картографирование мРНК также можно осуществить с помощью ферментативных реакций после транскрипции in vitro.
Модификация PolyA
Поли(A) хвост также увеличивает период полураспада мРНК in vivo и улучшает эффективность трансляции мРНК. Длина поли(A) хвоста должна составлять 100-300 нуклеотидов. Кроме того, модифицированный аденин увеличивает стабильность поли A хвоста против деградации клеточной РНазой. Поли A хвост может быть вставлен с помощью транскрипции in vitro, используя ДНК-шаблон, кодирующий поли A, что приводит к получению определенной длины последовательности поли A. Также можно использовать рекомбинантную поли А полимеразу для ферментативного полиаденилирования после транскрипции мРНК.
Модификация нуклеотидов
Модифицированные нуклеозиды могут ингибировать распознавание и/или активацию рецепторов распознавания паттернов (PRR) и повышать эффективность вакцин на основе mRNA двумя совершенно разными способами. Добавление определенных химически модифицированных нуклеозидов, включая псевдouriдин (ψ), 1-метилпсевдouriдин (m1ψ), тиоуридин (s4U) и 5-метилцитозин (m5C), может предотвратить активацию TLR7/8 и других рецепторов врожденного иммунитета, что значительно снижает иммуногенность mRNA.
Система доставки mRNA
Для сохранения функции mRNA она должна проникнуть в цитоплазму хозяина и выразить специфические антигены. Одной из самых сложных задач, стоящих перед вакцинами и терапевтическими средствами на основе mRNA, является доставка mRNA в целевые клетки с достаточным уровнем трансляции, для чего требуются высоко специфичные и эффективные системы доставки mRNA. Было разработано и использовано несколько векторов доставки mRNA, включая дендритные клетки (DC), протамин, катионные полимеры и катионные липосомы.
Комплексы катионных липидов с mRNA и другими препаратами могут образовывать наночастицы размером 80-200 нм, называемые липидными наночастицами (LNP). Как одна из самых передовых систем доставки mRNA, LNP включает ионизируемые катионные липиды, природные фосфолипиды, холестерин и полиглицерилэфир (PEG). Несколько РНК-вакцин и терапий (siRNA и mRNA), одобренных Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США, основаны на системах доставки LNP.
Yaohai Bio-Pharma Предлагает Комплексное Решение для РНК
На заказ Доставляемая Продукция
|
Grade
|
Результаты работы
|
Характеристики
|
Применения
|
|
не-GMP
|
Лекарственная субстанция, mRNA
|
0,1~10 мг (mRNA)
|
До клинические исследования, такие как трансфекция клеток, Разработка аналитических методов, Предварительные исследования стабильности, Разработка формулы
|
|
Лекарственный продукт, LNP-mRNA
|
|
GMP, Стерильность
|
Лекарственная субстанция, mRNA
|
10 мг~70 г
|
Заявка на исследуемый новый препарат (IND), Разрешение на клинические испытания (CTA), Обеспечение клинических испытаний, Заявка на лицензию биологического препарата (BLA), Коммерческое обеспечение
|
|
Лекарственный продукт, LNP-mRNA
|
5000 ампул или шприцев / картриджей
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
