Синтез мРНК in vitro
Основными компонентами мРНК являются 5'-кэп, 5'-UTR, открытая рамка считывания (ORF), 5'-UTR и 5'-полиА-хвост, которые необходимы для поддержания функции мРНК. Исследователи использовали различные методы для идентификации и оптимизации последовательностей и структур мРНК.
Синтез мРНК осуществляют на основе транскрипта in vitro (IVT) с использованием линейных ДНК-матриц, РНК-полимераз (Т3, Т7 или SP6), немодифицированных или модифицированных нуклеотидов, ферментов и соответствующих реагентов.
Модификация 5-футового колпачка
Последовательности зрелой мРНК эукариоцитов имеют кэп из 7-метилгуанозина (m7G) на 5'-конце, что улучшает стабильность мРНК и эффективность трансляции. Существует два основных метода захвата мРНК in vitro. Во-первых, мРНК можно кэпировать вместе с транскриптом in vitro, добавляя в систему IVT кэп-аналог структуры m7GpppG (например, CleanCap). Этот метод котранскрипционного кэпирования обеспечивает естественную структуру 5'-капсулы и повышает эффективность кэпирования почти до 90-99%. Во-вторых, картирование мРНК также можно выполнить путем картирования ферментативных реакций, следующих за реакцией транскрипции in vitro.
Модификация PolyA
Поли(А)-хвост также продлевает период полураспада мРНК in vivo и повышает эффективность трансляции мРНК. Длина амплифицированного поли(А)-хвоста должна составлять 100-300 нуклеотидов. Кроме того, модифицированный аденозин повышает устойчивость поли-А-хвоста против деградации клеточной РНКазы. Хвост поли А может быть вставлен посредством транскрипции in vitro с использованием матрицы ДНК, кодирующей поли А, что приводит к получению последовательности поли А определенной длины. Рекомбинантную полиА-полимеразу также можно использовать путем ферментативного полиаденилирования после транскрипции мРНК.
Модификация нуклеотидов
Модифицированные нуклеозиды могут ингибировать распознавание и/или активацию рецепторов распознавания образов (PRR) и повышать эффективность мРНК-вакцин двумя совершенно разными способами. добавление некоторых химически модифицированных нуклеозидов, в том числе псевдоуридина (ψ), 1-метилпсевдуридина (m1ψ), тиуридина (s4U) и 5-метилцитозина (m5C), может предотвратить активацию TLR7/8 и других рецепторов врожденного иммунитета, что значительно снижает иммуногенность. мРНК.
Система доставки мРНК
Для поддержания функции мРНК ей необходимо проникнуть в цитоплазму хозяина и экспрессировать специфические антигены. Одна из наиболее сложных задач, стоящих перед мРНК-вакцинами и терапевтическими средствами, заключается в доставке мРНК в клетки-мишени с достаточно высоким уровнем трансляции, поскольку для этого требуются высокоспецифичные и эффективные системы доставки мРНК. Было разработано и использовано несколько векторов доставки мРНК, включая дендритные клетки (ДК), протамин, катионные полимеры и катионные липосомы.
Комплексы катионных липидов с мРНК и другими препаратами могут вместе образовывать наночастицы размером 80-200 нм, называемые липидными наночастицами (ЛНЧ). Являясь одной из наиболее совершенных систем доставки мРНК, LNP включает ионизируемые катионные липиды, природные фосфолипиды, холестерин и полиэтиленгликоль (ПЭГ). Несколько РНК-вакцин и методов лечения (миРНК и мРНК), одобренных Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США, основаны на системах доставки ЛНП.
Yaohai Bio-Pharma предлагает универсальное решение для РНК
Индивидуальные результаты
|
Класс
|
Результат
|
Спецификация
|
Приложения
|
|
не GMP
|
Лекарственное вещество, мРНК
|
0.1~10 мг (мРНК)
|
Доклинические исследования, такие как трансфекция клеток, разработка аналитических методов, предварительные исследования стабильности, разработка рецептур.
|
|
Лекарственный препарат, ЛНП-мРНК
|
|
GMP, стерильность
|
Лекарственное вещество, мРНК
|
10 мг~70 г
|
Новый исследуемый препарат (IND), разрешение на клинические испытания (CTA), поставки для клинических испытаний, заявка на получение биологической лицензии (BLA), коммерческие поставки
|
|
Лекарственный препарат, ЛНП-мРНК
|
5000 флаконов или предварительно заполненных шприцев/картриджей.
|
RU
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕТ
PL
PT
RO
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
