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mRNA는 장 코딩 RNA의 일종으로, COVID-19 동안 더 넓은 범위의 사람들에게 안전하고 효율적으로 작용했습니다. 다른 장 코딩 RNA인 자가 증폭 RNA(saRNA)와 원형 mRNA(circRNA)도 사전 임상 및 임상 연구에서 효율성을 보여주었습니다.
장 코딩 RNA의 대규모 생산은 여러 효소 반응에 의한 체외 전사(IVT)에 의존합니다. RNA 생산 단계에는 템플릿 DNA 준비, IVT RNA 합성, 순환화, DNA 제거, RNA 수정(캡핑 및 테일링), 그리고 RNA 정제가 포함됩니다.
장 코딩 RNA 생산(예: mRNA, saRNA, circRNA)에 사용되는 몇 가지 핵심 효소로는 제한 제나ucle아제, T7 RNA 폴리머라제(T7 RNAP), RNase 억제제, 무기 피로인산효소, DNase I, 바시니아 캡핑 효소, 그리고 RNase R가 있습니다.
공정 |
효소 |
기능 |
템플릿 DNA 준비 |
제한성 내핵산 |
플라스미드 DNA(pDNA)를 선형화하여 더 긴 전사체가 생성되는 것을 방지한다. |
체외 전사(RNA 합성) |
T7 RNA 폴리머라제 (T7 RNAP) |
T7 프로모터에 결합하여 특정한 RNA 전사체를 생성하다; 체외 전사 반응 중 주요 역할을 하다. |
RNase 억제제, 재조합형 |
IVT 반응 중 RNase 활성을 억제한다. |
|
피로인산효소, 무기 (iPPase) |
IVT 반응 중 피로인산의 형성을 방지한다. |
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DNA 제거 |
DNase I |
DNA 템플릿을 제거하십시오. |
RNA 수정 |
바실레아 캡핑 효소 |
IVT mRNA의 5′ 말단에 Cap1 구조를 추가합니다. |
2’-O-메틸트랜스퍼라제 |
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circRNA 풍부화 | Rnase r | 선형 RNA를 소화하고 순환 RNA를 풍부하게 합니다. |