mRNA 효능 분석의 중요성
mRNA 백신 및 치료제의 급속한 개발로 인해 mRNA의 번역 효율성과 관련된 효능(생물학적 활성 정의)을 테스트하려면 특정 분석 방법 패널이 필요합니다. 이러한 방법은 일반적으로 표적 단백질의 세포 형질감염 및 기능적 분석을 기반으로 합니다.
Yaohai Bio-Pharma는 세포 형질감염(293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 세포 등) 및 ELISA 또는 Western Blotting(WB) 분석을 포함하여 mRNA 약물 물질 또는 LNP 제품에 대한 세포 기반 효능 분석을 제공합니다.
역가 분석에 대한 규제 요건
WHO 규제 고려사항에 따르면, “최종 백신의 각 로트의 효능은 적절하게 정량적이고 검증된 기능적 방법을 사용하여 결정되어야 합니다. 잠재적인 시험관 내 효능 분석에는 세포 기반 형질감염 시스템 또는 무세포 분석이 포함될 수 있습니다." 그리고 USP에서는 mRNA의 효능, 즉 표적 단백질의 발현을 테스트하기 위해 "세포 기반 분석"을 권장했습니다.
순서
1단계. mRNA 또는 mRNA-LNP를 이용한 세포 기반 형질감염
세포를 배양하고 mRNA 또는 mRNA-LNP로 형질감염시킵니다. 구체적으로 mRNA는 형질감염 시약과 혼합된 후 형질감염되는 반면, mRNA-LNP는 세포 내로 직접 형질감염된다. 24~48시간 후, 원심분리를 통해 발현된 단백질이 포함된 상등액을 정제합니다.
2단계. 표적 단백질의 기능적 분석
ELISA 또는 WB 분석을 수행하여 표적 단백질의 기능적 결합을 평가합니다.
사례 연구
mRNA 샘플의 세포 기반 효능 분석
Yaohai-BioPharma는 세포 배양, 세포 형질감염 및 단백질 기능 분석을 포함하는 mRNA에 대한 세포 기반 효능 분석 방법을 개발했습니다. eGFP mRNA, mCherry mRNA, 루시퍼라제 mRNA, 스파이크 단백질 mRNA를 293T 세포에 형질감염시키고, 형광, 발광 또는 착색 신호, WB, ELISA를 통해 표적 단백질을 검출했습니다.
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