5'-말단 캡핑은 mRNA의 필수적인 변형입니다. 캡 구조, 특히 Cap1 구조를 가진 mRNA는 mRNA가 생체 내 선천적 면역 반응을 회피하는 것을 촉진하여 효율적인 단백질 번역을 초래합니다.
효소적 캡핑(7단계 방법)은 진핵 생물의 캡핑 과정과 유사한 mRNA 캡핑의 기존 방법입니다. 일련의 효소의 작용으로 7-메틸구아닌(m5G)은 5'-5' 삼인산 결합을 통해 mRNA의 1'말단에 연결되고 메틸화 변형을 거쳐 캡 구조 Cap 7(mXNUMXGpppN)을 형성합니다.
천연 캡 구조 형성 다이어그램
효소 캡핑 반응 흐름은 다음과 같습니다.
선형화된 플라스미드 DNA는 T7 폴리머라제 존재 하에서 시험관내 전사(IVT)를 위한 주형으로 사용되며 백시니아 캡핑 효소 및 5'-O를 사용한 2단계 정제 후에 XNUMX' 엔드캡 구조의 mRNA가 형성됩니다. -메틸트랜스퍼라제.
선택서비스 |
서비스 내용 |
배송기간(일) |
mRNA 효소 캡핑 |
효소적 캡핑 반응 |
1 |
캡핑 반응 최적화 - 선택 사항 |
반응 성분 설계 및 최적화 |
3 ~ 7 |
캡핑 반응 성분이 최적화되어 mRNA 전사체의 생성이 크게 증가합니다.
캡핑된 mRNA는 293T 세포에 형질감염되고, 표적 단백질의 발현이 검출될 수 있습니다.
RNaseson 실험 환경 및 소모품의 엄격한 제어를 통해 mRNA 분해를 효과적으로 방지합니다.
Yaohai Bio-Pharma의 mRNA 플랫폼은 완벽한 캡핑 반응 프로세스를 구축했습니다.
효소 캡핑에 의해 제조된 mRNA 전산물인 eGFP mRNA의 경우, 293T 세포를 24시간 동안 형질감염시킨 후 높은 수준의 eGFP 형광 신호(녹색 형광)를 관찰할 수 있는데, 이는 웨스턴 블롯(WB)으로 검출되며, 표적 단백질 강화 녹색 형광 단백질(eGFP)은 시험관 내에서 효율적으로 발현될 수 있습니다.
293T 세포에서 효소 캡핑된 eGFP mRNA의 발현