5'-끝 캡핑은 mRNA의 필수적인 변형입니다. 캡 구조를 가진 mRNA, 특히 Cap1 구조는 mRNA가 체내에서 선천적 면역 반응을 회피하도록 돕고 효율적인 단백질 번역을 유도합니다.
효소적 캡핑(두 단계 방법)은 진핵 생물의 캡핑 과정과 유사한 전통적인 mRNA 캡핑 방법입니다. 일련의 효소들의 작용으로 7-메틸구아닌(m7G)이 5'-5' 삼인산 결합을 통해 mRNA의 5'-끝에 연결되고 메틸화 수정을 거쳐 Cap 1 (m7GpppN) 구조를 형성합니다.
자연 캡 구조 형성 다이어그램
효소적 캡핑 반응 흐름은 다음과 같습니다:
선형화된 플라스미드 DNA는 T7 폴리머라제 존재 하에 체외 전사(IVT)의 템플릿으로 사용되며, 백신ivirus 캡핑 효소와 2'-O-메틸트랜스퍼라제를 이용한 한 단계 정제 후 5'-끝 캡 구조를 가진 mRNA가 형성됩니다.
서비스 세부사항
선택적 서비스 |
서비스 상세 |
납기(일) |
mRNA 효소적 캡핑 |
효소적 캡핑 반응 |
1 |
캡핑 반응 최적화 - 선택사항 |
반응 구성 요소 설계 및 최적화 |
3~7 |
우리의 특징
캡핑 반응 구성 요소가 최적화되어 mRNA 전사체의 생산이 크게 증가되었습니다.
캡핑된 mRNA가 293T 세포에 전달되었으며, 대상 단백질의 발현을 검출할 수 있었습니다.
실험 환경 및 소모품에서 RNase를 엄격히 통제함으로써 mRNA의 분해를 효과적으로 방지했습니다.
사례 연구
요하이 바이오-파마의 mRNA 플랫폼은 완벽한 캡핑 반응 공정을 구축했습니다.
효소에 의해 캡핑된 eGFP mRNA 사전 제품의 경우, 293T 세포를 전달한 후 24시간 동안 높은 수준의 eGFP 형광 신호(녹색 형광)를 관찰할 수 있으며, 이는 서던 블롯(WB)으로 검출되며, 대상 단백질인 강화된 녹색 형광 단백질(eGFP)이 체외에서 효율적으로 발현됨을 보여줍니다.
효소로 캡핑된 eGFP mRNA의 293T 세포 내 발현
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