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체외 전사 및 순환

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IVT RNA

체외 전사 및 순환

RNA 전구체의 배치 제조에 대해 일반적으로 사용되는 방법은 체외 전사 (IVT)입니다. IVT 반응은 T7 프로모터를 포함하는 선형화된 플라스미드 DNA를 템플릿으로 사용하고, T7 RNA 폴리머라제가 존재할 때 핵산 삼인산(NTPs)을 기질로 하여 RNA 전구체를 합성합니다.

체외 순환 방법에는 화학적 연결, 효소적 연결 및 순열된 인트론-엑손(PIE) 방법이 포함됩니다. 화학적 연결과 효소적 연결은 짧은 RNA의 순환에 적합합니다. 조각이 100 nt보다 클 경우 순환율이 크게 감소합니다. 대조적으로, PIE 시스템을 기반으로 하는核酸 분해효소 방법은 8 kb 서열의 순환을 달성할 수 있습니다.

구아노신 삼인산 (GTP)의 촉매 작용 아래, PIE 구조는 엑스트라 인트론 시퀀스의 환화를 겪습니다. 적절한 전략을 통해 환화 속도를 증가시킬 수 있으며, 야오하이 바이오-파마는 최대 4kb 시퀀스의 환화를 달성할 수 있고, 환화 효율은 80% 이상입니다.

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RNA의 체외 환화 반응은 다음과 같이 진행됩니다:

RNA 전구체는 체외 전사에 의해 합성되며, GTP의 촉매 작용 아래 PIE 구성 요소는 자가 스플라이싱을 완료하여 circRNA를 형성합니다.

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서비스 세부사항
공정 서비스 상세 납기(작업일)
체외 전사 및 순환 반응 시스템 확인 1-2
체외 전사 및 순환화 반응
RNase R 소화
반응 최적화 반응 조성물, 시간 최적화 2-5
우리의 특징
    • 엄격한 테스트 설계 및 최적화

최대 4 kb의 RNA 순환화가 달성될 수 있습니다.

    • 높은 순환 효율

합리적인 시퀀스 최적화 전략을 통해 80% 이상의 순환율이 달성될 수 있습니다.

    • RNase에 대한 엄격한 관리

실험 환경 및 소모품에서 RNase를 엄격히 통제함으로써 RNA 분해가 효과적으로 방지됩니다.

사례 연구

체외 circRNA 순환화 및 풍부화

PIE 시스템을 기반으로 Yaohai Bio-Pharma는 circRNA의 시퀀스를 최적화하여 아가로스 겔 전기영동(AGE)을 통해 80% 이상의 순환율을 달성했습니다. RNase R을 사용하여 circRNA를 풍부화하면 E-gel 전기영동 결과에서 선형 RNA 전구체가 분해되며, 추가 정제 후 대부분의 절단된 circRNA가 제거됩니다. 정제 용액은 Yaohai Bio-Pharma에서 자체 개발했습니다.

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체외 circRNA 순환 및 풍부화

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