סינתזה חוץ גופית של mRNA
המרכיבים העיקריים של mRNA הם 5'-cap, 5'-UTR, מסגרת קריאה פתוחה (ORF), 5'-UTR ו-5' poly A זנב, החיוניים לשמירה על תפקוד ה-mRNA. חוקרים השתמשו במגוון שיטות כדי לזהות ולייעל רצפים ומבנים של mRNA.
הסינתזה של mRNA מבוצעת על בסיס תמליל חוץ גופית (IVT) באמצעות תבניות DNA ליניאריות, פולימראזות RNA (T3, T7 או SP6), נוקלאוטידים לא מותאמים או מותאמים, אנזימים וריאגנטים מתאימים.
שינוי כובע 5'
הרצפים של mRNA בוגר מאאוקריוציטים מראים מכסה 7-מתילגואנוזין (m7G) בקצה 5', המשפר את יציבות ה-mRNA ויעילות התרגום. ישנן שתי שיטות כלליות ללכידת mRNA במבחנה. ראשית, ניתן להגביל את ה-mRNA יחד עם תמלול במבחנה על ידי הוספת אנלוגי כובע של מבנה m7GpppG (למשל, CleanCap) למערכת IVT. שיטת מכסה משותפת זו מספקת מבנה כמוסה טבעי של 5' ומגבירה את יעילות המכסה לכמעט 90-99%. שנית, מיפוי mRNA יכול להתבצע גם על ידי מיפוי תגובות אנזימים בעקבות תגובת השעתוק במבחנה.
שינוי PolyA
זנב Poly(A) מאריך גם את זמן מחצית החיים של mRNA in vivo ומשפר את יעילות התרגום של mRNA. אורך זנב הפולי(A) המוגבר צריך להיות 100-300 נוקלאוטידים. בנוסף, אדנוזין שונה מגביר את היציבות של זנב הפולי A נגד פירוק RNase תאי. ניתן להחדיר זנב Poly A על ידי שעתוק במבחנה באמצעות תבנית DNA המקודדת לפולי A, ובכך לגרום לאורך רצף poly A ספציפי. ניתן להשתמש בפולימראז רקומביננטי בפולי A גם על ידי פוליאדנילציה אנזימטית לאחר שעתוק mRNA.
שינוי נוקלאוטידים
נוקלאוזידים מותאמים יכולים לעכב זיהוי ו/או הפעלה של קולטני זיהוי דפוסים (PRR) ולשפר את היעילות של חיסוני mRNA בשתי דרכים שונות לחלוטין. תוספת של נוקלאוזידים מסוימים שעברו שינוי כימי כולל פסאודורידין (ψ), 1-מתילפסאודורדין (m1ψ), תיאורידין (s4U) ו-5-מתילציטוזין (m5C) יכולה למנוע את ההפעלה של TLR7/8 וקולטנים חיסוניים מולדים אחרים, אשר מפחיתים באופן משמעותי את האימונוגניות. של mRNA.
מערכת אספקת mRNA
כדי לשמור על תפקוד ה-mRNA, הוא צריך להיכנס לציטופלזמה המארח ולבטא אנטיגנים ספציפיים. אחד האתגרים הקשים ביותר העומדים בפני חיסוני mRNA וטיפולים טמון באספקת mRNA לתאי מטרה עם רמות תרגום גבוהות מספיק בשביל שזה דורש מערכות אספקת mRNA ספציפיות ויעילות ביותר. פותחו והשתמשו בכמה וקטורים לאספקת mRNA, כולל תאים דנדריטים (DCs), פרוטמין, פולימרים קטיוניים וליפוזומים קטיוניים.
קומפלקסים של שומנים קטיוניים עם mRNA ותכשירים אחרים יכולים ליצור ביחד ננו-חלקיקים בגודל 80-200 ננומטר בשם ננו-חלקיקים ליפידים (LNPs). כאחת ממערכות אספקת ה-mRNA המתקדמות ביותר, LNP כולל שומנים קטיוניים מייננים, פוספוליפידים טבעיים, כולסטרול ופוליאתילן גליקול (PEG). מספר חיסוני RNA וטיפולים (siRNA ו-mRNA) שאושרו על ידי מינהל המזון והתרופות האמריקאי מבוססים על מערכות אספקת LNP.
Yaohai Bio-Pharma מציעה פתרון חד פעמי ל-RNA
משלוחים מותאמים אישית
|
ציון
|
תוצרים
|
מִפרָט
|
יישומים
|
|
ללא GMP
|
חומר סמים, mRNA
|
0.1~10 מ"ג (mRNA)
|
מחקר פרה-קליני כגון טרנספקציה של תאים, פיתוח שיטות אנליטיות, מחקרים קדם-יציבות, פיתוח פורמולציות
|
|
מוצר תרופתי, LNP-mRNA
|
|
GMP, סטריליות
|
חומר סמים, mRNA
|
10 מ"ג ~ 70 גרם
|
תרופה חדשה למחקר (IND), אישור ניסויים קליניים (CTA), אספקת ניסויים קליניים, בקשה לרישיון ביולוגי (BLA), אספקה מסחרית
|
|
מוצר תרופתי, LNP-mRNA
|
5000 בקבוקונים או מזרקים/מחסניות מלאים מראש
|
IW
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
לא
PL
PT
RO
RU
ES
SV
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
