mRNA מגביר עצמי (saRNA), הידוע גם בשם רפליקון RNA, מקודד לרצפי mRNA לתעתוק מבחנה (IVT) וגנים משוכפלים ויראליים שמקורם בנגיפים אלפא או flavivirus. גנים משוכפלים ויראליים מאפשרים הגברה עצמית של ה-mRNA, מה שגורם לביטוי חלבון מוגבר ולמינון מינימלי נדרש של RNA בהשוואה ל-mRNA שאינם מגבירים. היבט נוסף הוא ש-saRNA היא מולקולה גדולה יחסית (יותר מ-14 קילובייט).
Yaohai Bio-Pharma הקימה קבוצה של טכנולוגיות סינתזת mRNA כדי לספק mRNA שאינו מגביר ו-mRNA מגביר עצמי (1000 nt~14000 nt), כגון עיצוב ואופטימיזציה של רצף, IVT, טיהור, ליאופיליזציה וכוסות ננו-חלקיקי שומנים (LNP) . כל המוצרים משוחררים תחת תקני בקרת איכות מחמירים.
איור 1 תכונות מבניות של mRNA IVT: mRNA קונבנציונלי, מעגלי ומגביר עצמי.
ה-RNA המגביר את עצמו מורכב מארבעה חלבונים שאינם מבניים (המוגדרים כ-nsP1, nsP2, nsP3 ו-nsP4), שמקורם בנגיפים אלפא, וירוס ה-Venzuelan Equine Encephalitis (VEEV). בין אלה, nsP1 מציג פעילויות אנזימטיות כפולות, כלומר GTase ו-N7MTase, בעוד של-nsP2 יש פעילות RTPase, חיונית לכיסוי ה-IVT mRNA ליצירת מבנה Cap 0. בנוסף, nsP2 משמש כפרוטאז והליקאז, מה שמקל על העיבוד המורכב של קומפלקס ה-nsP כולו. התפקוד המדויק של nsP3 נותר חמקמק, אך הוא עוסק באינטראקציות עם חלבוני תאי מארח מגוונים, ובכך תורם להחלשת התגובה האנטי-ויראלית המופעלת על ידי המארח.
אזור מקדם תת-גנומי של אלפא וירוס (SGP) ממוקם לפני הגן המעניין (GOI). אלמנט SGP מקל על התחלת שעתוק GOI על ידי עקיפת קריאת הרצף המקודד לחלבוני nsP ויראליים.
איור 2 סינתזה ומבחני תאים של eGFP saRNA של Yaohai Bio-Pharma RNASci Platform.
פרוטוקול הסינתזה של saRNA דומה ל-mRNA: סינתזת mRNA מותאמת אישית