דף הבית > RNA ITV > סינתזה מותאמת של RNA > סינתזה מותאמת של mRNA > הצמדת mRNA אנזימטית
סימון הקצה 5' הוא שדרוג חיוני של mRNA. mRNA עם מבנה כובע, במיוחד מבנה כובע מסוג Cap1, עוזרים ל-mRNA להתחמק מתגובות החיסון הפנימיות בגוף, מה שגורם לתרגום יעיל של חלבונים.
סימון אנזימטי (השיטה בשני שלבים) הוא השיטה המסורתית לסימון mRNA, דומה לשיטת הסימון באורגניזמים אוקריוטיים. תחת פעולת סדרה של אנזימים, הגואנין המתילט (m7G) מחובר לקצה 5' של mRNA דרך קשר טריפוספטט 5'-5' ועובר תהליך של מתילציה כדי ליצור את מבנה הכובע Cap1 (m7GpppN).
דיאגרמת תהליך יצירת מבנה הכובע הטבעי
תהליך התגובה לסימון אנזימטי הוא כדלקמן:
DNA של פלזמיד ליניארית משמשת כתבנית עבור תרנגולת חוץ-גופית (IVT) בהשתתפות T7 פולימראז, ו-mRNA עם מבנה קפ בקצה 5' נוצר לאחר טיהור חד-שלבי באמצעות אנזים הקפ מ-Vaccinia ו-2'-O-מيثילטרנספראז.
שירות אופציונלית |
פרטי שירות |
תקופת הובלה (יום) |
הצמדת mRNA אנזימטית |
תגובה הקפה אנזימטית |
1 |
הערכה של תגובה הקפה - אופציונלית |
עיצוב והשגת רכיבי התגובה |
3~7 |
רכיבי תגובה הקפה הוערכו, והיצור של mRNA הוגדל בצורה משמעותית.
ה-mRNA עם הכובע מופחת לתוך תאים 293T, והביטוי של הפרוטאין המטרה יכול להיות נתפס.
באמצעות שליטה חמורה ברנazes על הסביבה התperimentלית והמוצרי הפעולה, נמנעת בצורה יעילה התפרקות של mRNA.
הפלטפורמה של mRNA של יאוחי ביו-פארמה בנתה תהליך כיסוי מושלם.
עבור mRNA של eGFP, mRNA פרודוקט מוקדם שנוצר על ידי כיסוי אנזימטי, ניתן לצפות בסיגנל פלורסנטי של eGFP (פלורסצנט ירוק) ברמה גבוהה לאחר העברת תאים 293T למשך 24 שעות, שנדון באמצעות Western Blot (WB), מה שמראה שהפרוטאין המטרה, פלורסצנט ירוק מוגבר (eGFP), יכול לבוא לידי ביטוי בצורה יעילת מחוץ לגוף.
ביטוי של mRNA של eGFP מכוסה אנזימטית בתאים 293T
Yaohai Bio-Pharma התמקדה בפתרונות פתרונות CRDMO מיקרוביולוגיים במשך 14 שנים. אנו מספקים שירותים של ביולוגיים משלבים אחד ללקוחות ברחבי העולם.
No. 801, Jiankang Avenue, Taizhou, Jiangsu, China
Copyright © Yaohai Biopharmaceutical Co., Ltd. All Rights Reserved | מדיניותICY
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN