בתהליך ההכנה של mRNA לתעתוק במבחנה (IVT), נדרש DNA פלסמיד ליניארי כתבנית התעתוק ל-IVT בעזרת T7 RNA פולימראז. DNA פלסמיד איכותי חיוני לתעתוק במבחנה.
בהתבסס על פלטפורמת השירות להכנת פלסמידים בוגרים, Yaohai Bio-Pharma יכולה להציע שירות הכנת DNA של פלסמיד ליניארי בטוהר גבוה ובסטנדרט גבוה להשגת תמלול IVT יעיל.
התַהֲלִיך | שירות אופציונלי | פרטי השירות | תקופת אספקה (יום עבודה) |
הכנת פלסמיד מעגלית | סינתזת גנים | סינתזת גנים (צד שלישי) | 7-10 |
הגברה של פלסמיד | הגברה של פלסמיד | 2 | |
מיצוי פלסמיד | |||
הכנת פלסמיד לינארית | ליניאריזציה וטיהור של פלסמיד | ליניאריזציה של פלסמיד | 1 |
טיהור DNA ליניאריזציה | |||
בקרת איכות DNA של פלסמיד | טוהר ריכוז | ספקטרופוטומטריה אולטרה סגול (UV). | 1-2 |
מבנה פלסמיד | אלקטרופורזה של ג'ל אגרוז (AGE) | ||
אלקטרופורזה נימית (CE)-אופציונלי | |||
זיהוי פלסמיד | זיהוי אנזים הגבלה/ AGE |
בחירה גמישה של שיטות לינאריזציה
אופטימיזציה של שיטות מיצוי וטיהור DNA להשגת שיעורי התאוששות גבוהים.
תקני בקרת תהליכים מחמירים, עם שיעור קונפורמציה על-הלילית של דגימות פלסמיד למחקר של למעלה מ-80%.
שירותי הכנת פלסמיד ובקרת איכות ברמה גבוהה ויעילות גבוהה כדי לענות על צורכי ניסוי.
אם לוקחים כדוגמה את המוצר mRNA_luciferase מקטלוג Yaohai Bio-Pharma, לדגימת הפלסמיד של תבנית התעתוק (דרגת מחקר) יש יחס על-הלילי של יותר מ-90%, יחס ליניאריזציה קרוב ל-100%, ויחס שעתוק שלאחר מכן עד 1:200 ( פלסמיד ליניאריזציה DNA:mRNA).
ה-mRNA_luciferase המתקבל באמצעות הכנת פלסמיד ליניאריזציה כתבנית עובר טרנספקציה לתאי 293T, ופעילות התגובה של אנזים-מצע מוערכת 24 שעות לאחר ההעברה.
ניתן לזהות אות פעילות לוציפראז חזק ברור, כלומר, חלבון הלוציפראז מתבטא ביעילות, מה שמרמז על הטוהר של תבנית השעתוק יכול לספק באופן מלא את הדרישה של הכנת mRNA באיכות גבוהה.
בדיקת יחס פלסמיד מפותלת
אימות של ביטוי mRNA של לוציפראז במבחנה