הכנת CircRNA דורשת RNA ליניארי כחומר מבשר (RNA precursor) למחזוריות, כאשר מבשר ה-RNA מוכן בדרך כלל באמצעות DNA פלסמיד ליניארי כתבנית שעתוק ומשועתק במבחנה בעזרת T7 RNA פולימראז.
DNA פלסמיד באיכות גבוהה חיוני לתעתוק במבחנה (IVT). בהתבסס על פלטפורמת השירות להכנת פלסמידים בוגרים, Yaohai Bio-Pharma יכולה לספק שירות הכנת פלסמיד ליניאריזציה DNA (pDNA) בטוהר גבוה וסטנדרטי כדי להבטיח את שלמות מוצרי IVT.
התַהֲלִיך | שירות אופציונלי | פרטי השירות | תקופת אספקה (יום עבודה) |
הכנת פלסמיד מעגלית | סינתזת גנים | סינתזת גנים (צד שלישי) | 7-10 |
הגברה של פלסמיד | הגברה של פלסמיד | 2 | |
מיצוי פלסמיד | |||
הכנת פלסמיד לינארית | ליניאריזציה וטיהור של פלסמיד | ליניאריזציה של פלסמיד | 1 |
טיהור DNA ליניאריזציה | |||
בקרת איכות DNA של פלסמיד | טוהר ריכוז | ספקטרופוטומטריה אולטרה סגול (UV). | 1-2 |
מבנה פלסמיד | אלקטרופורזה של ג'ל אגרוז (AGE) | ||
אלקטרופורזה נימית (CE)-אופציונלי | |||
זיהוי פלסמיד | זיהוי אנזים הגבלה/ AGE |
בחירה גמישה של שיטות לינאריזציה
אופטימיזציה של שיטות מיצוי וטיהור DNA להשגת שיעורי התאוששות גבוהים.
תקני בקרת תהליכים מחמירים, עם שיעור קונפורמציה על-הלילית של דגימות פלסמיד למחקר של למעלה מ-80%.
שירותי הכנת פלסמיד ובקרת איכות ברמה גבוהה ויעילות גבוהה כדי לענות על צורכי ניסוי.
אם ניקח לדוגמה את המוצר mCherry circRNA של Yaohai Bio-Pharma, יחס ה- supercoiled של דגימות פלסמיד תעתיק של תבניות (דרגת מחקר) הוא יותר מ-70%, עם שיעור ליניאריזציה של קרוב ל-100%.
mCherry circRNA מוכן עם פלסמיד ליניאריזציה כתבנית ומועבר לתאי 293T. רמה גבוהה של ביטוי הקרינה (קרינה אדומה) מתגלה לאחר 24 שעות של טרנספקציה, שתתגבר לאחר 48 שעות, ועדיין ניתן לזהות ביום ה-7 וביום ה-14 לאחר ההעברה.
חלבון mCherry מתבטא בצורה יציבה ויעילה, וטוהר תבנית התעתיק יכול לענות על הדרישה של מוצר תרופתי circRNA (DP) באיכות גבוהה.
אימות ביטוי במבחנה של mCherry circRNA