ההכנה של CircRNA דורשת RNA ליניארי כחומר גלם (RNA קדם-תור) לציקליזציה, כאשר חומר הגלם RNA מוכן בדרך כלל באמצעות DNA פלסמידי לינארי כתבנית טרנסקריפציה וטרנסקribed באופן מלאכותי בעזרת פולימראז RNA T7.
DNA פלסמידי באיכות גבוהה הוא חיוני עבור טרנסקריפציה מחוץ לגוף (IVT). על בסיס המפלט המבוגר של שירות הכנה של פלסמידים, יאוהאי ביופרמה מספקת שירות הכנה של DNA פלסמידי לינארי בפurity גבוה ובתקן כדי להבטיח את שלמותו של המוצר IVT.
תַהֲלִיך | שירות אופציונלית | פרטי שירות | תקופת מסירה (יום עבודה) |
הכנה של פלסמיד מעגלי | סינתזה גנונית | סינתזה של גן (של צד שלישי) | 7-10 |
הגדלת פלזמיד | הגדלת פלזמיד | 2 | |
הפרדת פלזמיד | |||
הכנה של פלזמיד ליניארי | ליניאריזציה וטהרה של פלסמיד | ליניאריזציה של פלזמיד | 1 |
טהור DNA לאחר ליניאריזציה | |||
בקרת איכות של DNA פלזמיד | עומס וטיהור | ספקטרופוטומטריה אולטרה-סגול (UV) | 1-2 |
צורת פלזמיד | אלקטרופורזה בגל אגרוז (AGE) | ||
אלקטרופורזיס קפילרית (CE) - אופציונלי | |||
היכרות עם פלזמיד | זיהוי אנזים הגבלה / AGE |
בחירה גמישה של שיטות ליניאריזציה
האצה של שיטות הוצאת DNA וטהרה כדי להשיג שיעורי תקלה גבוהים.
תקני בקרת תהליך חסכוניים, עם שיעור קונפורמציה סופרהלית של דגמי פלסמיד לחקר של יותר מ-80%.
שירותי הכנה וניהול איכות של פלסמידים ברמה גבוהה ואפקטיבית כדי לענות על צרכי ניסוי.
כדוגמה, ניקח את מוצר mCherry circRNA של Yaohai Bio-Pharma: היחס של דגמי פלסמיד תבנית טרנסקריפציה (דרגת מחקר) הוא יותר מ-70% בסיבוביות, עם שיעור של כמעט 100% בהשעמתה.
mCherry circRNA הכין באמצעות פלסמיד משועמת כטבנית והוכנס לתאים 293T. לאחר 24 שעות מההכנסה נמדדה ביטויי פלואורסנט גבוהים (פלואורסצncia אדומה), אשר יגברו לאחר 48 שעות ועדיין ניתן יהיה לגלותם ביום השביעי והארבעה עשר לאחר ההכנסה.
חלבון mCherry מתבטא בצורה יציבה וכפופה, והנקיון של התבנית הטרנסקריפציונית יכול לענות על דרישות המוצר התרפייתי circRNA (DP) באיכות גבוהה.
אימות ביטוי חוץ-גופי של mCherry circRNA