כל הקטגוריות
ENEN
תמלול במבחנה, IVT

תמלול במבחנה, IVT

עמוד הבית >  IVT RNA  >  סינתזת RNA מותאמת אישית  >  סינתזת mRNA מותאמת אישית  >  תמלול במבחנה, IVT

IVT RNA

IVT, תמלול במבחנה

לגבי ייצור המוני של mRNA, שעתוק במבחנה (IVT) היא שיטה יעילה ובוגרת יותר. תגובת IVT מאמצת DNA פלסמיד ליניארי המכיל את מקדם T7 כתבנית, ו-mRNA מסונתז עם טריפוספטים של נוקלאוזידים (NTPs) כמצעים בנוכחות T7 RNA פולימראז.

שינוי נוקלאוטידים הוא פריצת דרך בחקירת ה-mRNA, כאשר מולקולות mRNA ללא שינוי מזוהות על ידי חיישני RNA תוך-תאיים כדי להפעיל חסינות מולדת. משיקולים של אימונוגניות mRNA in vivo ויעילות התרגום, תהליך ה-IVT משתמש בדרך כלל בסוגים מסוימים של NTPs שונה, ונוקלאוטידים מתוקנים נפוצים הם פסאודורידין (Ψ), N1-מתיל-פסאודורידין (N1Ψ) ו-5-מתילציטוזין (5mC).

לא מוגדר

תהליך שעתוק במבחנה של mRNA

图片

דיאגרמת תגובה של תמלול במבחנה (IVT).

פרטי שירותים
שירות אופציונלי
פרטי השירות
תקופת אספקה ​​(יום עבודה)
תמלול במבחנה (IVT)
IVT, תמלול במבחנה1
שינויים בנוקלאוטידים (Ψ/N1Ψ/5mC וכו')
הסרת תבנית DNA (DNase I)
אופטימיזציה של מצב IVT - אופציונלי
עיצוב ואופטימיזציה של רכיבי תגובה IVT2-5
התכונות שלנו
  • אסטרטגיות מגוונות לשינוי נוקלאוטידים

שיפור יציבות mRNA וביטוי חלבון in vivo.

  • עיצוב ואופטימיזציה של בדיקות קפדניות

ניתן להשיג הכנת שברי mRNA של עד 10kb.

  • תמלול יעיל

על ידי אופטימיזציה של תנאי התגובה של IVT, קצב השעתוק הוא עד 1:200.

  • בקרה מחמירה של RNase

בקרה מחמירה של RNase באמצעות סביבת ניסוי וחומרים מתכלים יכולה למנוע ביעילות פירוק mRNA.

מקרה מבחן

מערכת התגובה הנוכחית של IVT מותאמת באופן גס למערכות סינתטיות באורך של כ-100 nt, לא עבור mRNA באורך שרירותי. ככל שרצף ה-mRNA ארוך יותר, כך קשה יותר לתמלל אותו ונוטה יותר להתדרדרות.

על מנת להכין רצפי mRNA מותאמים אישית באורך של כ-10 kb, Yaohai Bio-Pharma הכינה בהצלחה דגימות באיכות גבוהה עם יחס שעתוק גבוה של 1:135 והשיגה 135 מיקרוגרם של מוצרי mRNA מטוהרים תחילה לאחר 1 מיקרוגרם של פלסמיד ליניאריזציה תומלל במבחנה באמצעות תכנון ניסוי קפדני, אופטימיזציה מתמשכת של תנאי התגובה ובקרה קפדנית על RNase.

图片

mRNA Identify (Agarose Gel Electrophoresis)

קבל הצעת מחיר חינם

נהיה בקשר