Enzymatické činidlo

Metóda

Proteázy na odstránenie značiek

Na zlepšenie rozpustnosti a zjednodušenie procesu čistenia rekombinantných proteínov výskumníci zvyčajne pridávajú fúzne značky, z ktorých sa bežne používajú His-tag, maltózu viažuci proteín (MBP) a glutatión-S-transferáza (GST).

Hoci je označený ako ďalšia sekvencia proteínu, mal by byť odstránený, aby sa zachovala biologická aktivita vo farmaceutickom priemysle. Odstránenie fúznych značiek vyžaduje miestne špecifické proteázy, ako je enterokináza (EK), trombín, proteáza vírusu tabakového etch (TEVp), proteáza ľudského rinovírusu 3C (HRV3C), proteáza proteínu modifikujúceho ubikvitín (SUMO), vírus škvrnitosti tabakových žíl ( TVMV) proteáza a karboxypeptidáza A/B (CPA/CPB).

Typ	Enzým	Rozpoznávací web
Endoproteázy na odstránenie značiek	Enterokináza (EK), Enteropeptidáza	DDDDK↓
	trombínu	LVPR↓GS
	TEV proteáza	ENLYFQ↓G
	HRV3C proteáza	LEVLFQ↓GP
	SUMO proteáza	SUMO terciárna štruktúra
	TVMV proteáza	ETVRFQG↓S
Odstránenie značky exoproteázy	Karboxypeptidáza A (CPA)	C-koncové aminokyseliny, okrem Pro, Lys a Arg
Odstránenie značky exoproteázy	Karboxypeptidáza B (CPB)	C-koncový Lys a Arg

Iné proteázy

Využitie	Enzým	Funkcie
Iné proteázy	Proteáza K	Serínová proteáza, ktorá trávi proteíny hydrolýzou peptidových väzieb.
	IdeS, IgG proteáza	Enzýmy degradujúce IgG (Ides), ktoré štiepia na špecifickom mieste imunoglobulínu G (IgG) a vytvárajú fragmenty Fab a Fc
	IgA1 proteáza	Proteolytický enzým, ktorý štiepi špecifické miesto v sekvencii pántovej oblasti ľudského imunoglobulínu Al (IgA1).

Nukleáza

Využitie	Enzým	Funkcie
Nukleáza	Nukleáza	Štiepi nukleové kyseliny (DNA alebo RNA) hydrolýzou fosfodiesterových väzieb.
Nukleáza	Obmedzte enzým	Endonukleáza, ktorá štiepi DNA na špecifických miestach alebo v ich blízkosti.

Amidase

Využitie	Enzým	Funkcie
Amidase	PNGase F	Štiepi medzi najvnútornejšími GlcNAc a asparagínovými zvyškami vysokomanózových, hybridných a komplexných oligosacharidov.

Všetky kategórie

Enzymatické činidlo

Metóda