Proces |
Voliteľná služba |
Detaily služby |
Dodacia lehota (deň) |
Návrh a optimalizácia sekvencie circRNA |
Návrh a optimalizácia kódovacích sekvencií |
CDS optimalizácia kodónov |
1 |
Návrh a optimalizácia nekódujúcich sekvencií |
Sekvencia intrónov a exónov, návrh a optimalizácia homológneho ramena a spacera |
1-2 |
Príprava cirkulárneho plazmidu |
Gene Synthesis |
Génová syntéza (tretia strana) |
7-10 |
Amplifikácia plazmidu |
Amplifikácia plazmidu |
2 |
Extrakcia plazmidu |
Príprava linearizovaného plazmidu |
Linearizácia a čistenie plazmidu |
Linearizácia plazmidu |
1 |
Linearizácia Purifikácia DNA |
In vitro transkripcia a cyklizácia |
In vitro transkripcia a cyklizácia |
In vitro transkripčné a cyklizačné reakcie |
1-2 |
RNase R Digestion |
Optimalizácia - voliteľná |
Zloženie reakcie, optimalizácia času |
2-5 |
Purifikácia circRNA |
Konvenčný spôsob čistenia |
Zrážanie chloridu lítneho |
1 |
Čistenie magnetických guľôčok |
1 |
Vysoko čistá purifikácia circRNA |
Preparatívna vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC) |
1-2 |
Výmena vyrovnávacej pamäte |
ultrafiltrácia |
1 |
Lyofilizácia circRNA |
Vzorová náplň |
Plniaca |
2-3 |
Lyofilizácia |
Predmrazenie |
Primárne sušenie (sublimácia) |
Sekundárne sušenie (desorpcia) |
Zapuzdrenie circRNA-LNP |
Zapuzdrenie LNP |
Predúprava materiálu a kvapaliny |
2 |
Miešanie mikrofluidných zariadení |
Výmena vyrovnávacej pamäte |
Tangenciálna prietoková filtrácia |
1 |
sterilizovať |
Filtrácia |
Kontrola kvality plazmidovej DNA |
Koncentrácia/čistota |
Ultrafialová (UV) spektrofotometria |
1-2 |
Plazmidová konformácia |
Elektroforéza na agarózovom géli (AGE) |
Kapilárna elektroforéza (CE) - voliteľná |
Identifikácia plazmidu |
Identifikácia reštrikčného enzýmu/vek |
Kontrola kvality circRNA |
Koncentrácia/čistota |
Ultrafialová (UV) spektrofotometria |
- |
Čistota |
Elektroforéza na agarózovom géli (AGE)/E-gél |
0.5 |
HPLC - voliteľné |
1 |
Kontrola kvality circRNA-LNP |
Účinnosť zapuzdrenia |
RiboGreen metóda |
1 |
Veľkosť častice |
Dynamický rozptyl svetla (DLS) |
1 |
Index polydisperzity |
Dynamický rozptyl svetla (DLS) |
1 |
Zeta potenciál |
Dynamický rozptyl svetla (DLS) |
1 |
Bunkový test potencie |
Bunková transfekcia |
Bunkové platne, bunková transfekcia |
4 |
Detekcia cieľových bielkovín |
Fluorescenčné pozorovanie, Western Blot/ELISA |
1-3 |