Kruhová mRNA (circRNA) bola široko používaná pri štúdiu funkcií génov alebo proteínov. Medzitým je populárny vo vývoji profylaktických a terapeutických biologických látok, podobných mRNA.
Spoločnosť Yaohai Bio-Pharma vytvorila súbor technológií syntézy circRNA na poskytovanie vysokokvalitnej RNA, ako je návrh a optimalizácia sekvencie, in vitro transkripcia (IVT), cirkularizácia/cyklizácia, purifikácia a zapuzdrenie lipidových nanočastíc (LNP). Všetky produkty podliehajú prísnym štandardom kontroly kvality (QC).
V porovnaní s lineárnou mRNA je kruhová RNA (circRNA) stabilnejšia v štruktúre a je hlavným horúcim miestom v súčasnom výskume liekov na báze nukleových kyselín. Má širokú škálu aplikácií v rôznych oblastiach, či už ako kódujúca circRNA alebo nekódujúca circRNA, vrátane profylaktických vakcín proti infekčným chorobám, terapeutických onkologických vakcín, terapeutických onkologických liekov, proteínovej substitučnej terapie, regeneratívnej medicíny, bunkovej a génovej terapie (CGT) , úloha molekulárnej huby a RNA aptamér.
Proces | Voliteľná služba | Detaily služby | Dodacia lehota (deň) |
Návrh a optimalizácia sekvencie circRNA | Návrh a optimalizácia kódovacích sekvencií | CDS optimalizácia kodónov | 1 |
Návrh a optimalizácia nekódujúcich sekvencií | Sekvencia intrónov a exónov, návrh a optimalizácia homológneho ramena a spacera | 1-2 | |
Príprava cirkulárneho plazmidu | Gene Synthesis | Génová syntéza (tretia strana) | 7-10 |
Amplifikácia plazmidu | Amplifikácia plazmidu | 2 | |
Extrakcia plazmidu | |||
Príprava linearizovaného plazmidu | Linearizácia a čistenie plazmidu | Linearizácia plazmidu | 1 |
Linearizácia Purifikácia DNA | |||
In vitro transkripcia a cyklizácia | In vitro transkripcia a cyklizácia | In vitro transkripčné a cyklizačné reakcie | 1-2 |
RNase R Digestion | |||
Optimalizácia - voliteľná | Zloženie reakcie, optimalizácia času | 2-5 | |
Purifikácia circRNA | Konvenčný spôsob čistenia | Zrážanie chloridu lítneho | 1 |
Čistenie magnetických guľôčok | 1 | ||
Vysoko čistá purifikácia circRNA | Preparatívna vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC) | 1-2 | |
Výmena vyrovnávacej pamäte | ultrafiltrácia | 1 | |
Lyofilizácia circRNA | Vzorová náplň | Plniaca | 2-3 |
Lyofilizácia | Predmrazenie | ||
Primárne sušenie (sublimácia) | |||
Sekundárne sušenie (desorpcia) | |||
Zapuzdrenie circRNA-LNP | Zapuzdrenie LNP | Predúprava materiálu a kvapaliny | 2 |
Miešanie mikrofluidných zariadení | |||
Výmena vyrovnávacej pamäte | Tangenciálna prietoková filtrácia | 1 | |
sterilizovať | Filtrácia | ||
Kontrola kvality plazmidovej DNA | Koncentrácia/čistota | Ultrafialová (UV) spektrofotometria | 1-2 |
Plazmidová konformácia | Elektroforéza na agarózovom géli (AGE) | ||
Kapilárna elektroforéza (CE) - voliteľná | |||
Identifikácia plazmidu | Identifikácia reštrikčného enzýmu/vek | ||
Kontrola kvality circRNA | Koncentrácia/čistota | Ultrafialová (UV) spektrofotometria | - |
Čistota | Elektroforéza na agarózovom géli (AGE)/E-gél | 0.5 | |
HPLC - voliteľné | 1 | ||
Kontrola kvality circRNA-LNP | Účinnosť zapuzdrenia | RiboGreen metóda | 1 |
Veľkosť častice | Dynamický rozptyl svetla (DLS) | 1 | |
Index polydisperzity | Dynamický rozptyl svetla (DLS) | 1 | |
Zeta potenciál | Dynamický rozptyl svetla (DLS) | 1 | |
Bunkový test potencie | Bunková transfekcia | Bunkové platne, bunková transfekcia | 4 |
Detekcia cieľových bielkovín | Fluorescenčné pozorovanie, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Transfekovali sme zosilnený zelený fluorescenčný proteín circRNA (eGFP circRNA), mCherry circRNA, luciferázovú circRNA do buniek 293T a detegovali sme cieľový proteín pomocou fluorescencie, luminiscenčného alebo farebného signálu, western blot (WB), enzýmovej imunoanalýzy (ELISA).
Bunkové testy účinnosti vzoriek circRNA od Yaohai Bio-Pharma