Kruhový mRNA (circRNA) sa široko používa pri štúdiu funkcií génu alebo bélkou. Zároveň je populárny pri vývoji prevencie a liečivých biologic, podobne ako mRNA.
Yaohai Bio-Pharma vyvinula sadu technológií na syntézu circRNA na poskytnutie kvalitného RNA, ako sú návrh a optimalizácia sekvencií, transkripcia in vitro (IVT), circularizácia/cyklinka, čistenie a encapsulácia do lipidových nanocastic (LNP). Všetky produkty sú uvoľnené za prísnych kritérií kontroly kvality (QC).
V porovnaní s lineárnym mRNA je cirkuľárne RNA (circRNA) štrukturálne stabilnejšie a je hlavným horkým témom v súčasnom výskume farmakologickej nukleového kyseliny. Má široké uplatnenie v rôznych oblastiach, či už ide o kodujúce circRNA alebo nekodujúce circRNA, vrátane preventívnych vakcín proti infekčným chorobám, liečivých onkológickych vakcín, liečivých onkológich liekov, terapie náhradou proteínov, regeneratívnej medicíny, bunecných a genovej terapie (CGT), úlohy molekulárneho šponu a RNA aptamery.
Proces | Voliteľná služba | Podrobnosti služby | Dobový obdobie doručenia (Deň) |
návrh a optimalizácia sekvencie circRNA | Návrh a optimalizácia kódovacích sekvencií | Optimalizácia CDS kodónov | 1 |
Návrh a optimalizácia nekódovacích postupností | Návrh a optimalizácia intronových a exonových sekvencií, homologických ramien a špecialistických priestorov | 1-2 | |
Príprava kruhového plazmidu | Syntéza genu | Syntéza genu (tretia strana) | 7-10 |
Amplifikácia plazmidu | Amplifikácia plazmidu | 2 | |
Extrákcia plazmidu | |||
Príprava lineárneho plazmidu | Linearizácia a čistenie plazmidu | Linearizácia plazmidu | 1 |
Čistenie linearizovaného DNA | |||
Transkripcia in vitro a cyklikácia | Transkripcia in vitro a cyklikácia | Reakcie transkripcie in vitro a cyklikácie | 1-2 |
Trávenie RNase R | |||
Optimalizácia - voliteľné | Skladba reakcie, optimalizácia času | 2-5 | |
čistenie circRNA | Konvenčná metóda čistenia | Precipitácia lithií chlóridom | 1 |
Čistenie pomocou magnetických častíc | 1 | ||
Veľmi čisté čištanie circRNA | Prípravná vysokotlaková kapilárna chromatografia (HPLC) | 1-2 | |
Výmena bufferu | Ultrafiltrácia | 1 | |
liofilizácia circRNA | Vyplnenie vzoru | Plnenie | 2-3 |
Lyofilizácia | Predzámrenie | ||
Prvá sušenie (sublimácia) | |||
Druhé sušenie (dezorpčné) | |||
encapsulation circRNA-LNP | LNP Encapsulation | Pretretment materiálu a kapaliny | 2 |
Mikrofluidické zameranie miešania | |||
Výmena bufferu | Tangenciálny tokovýfiltrovanie | 1 | |
Sterilizovať | Filtrácia | ||
Kontrola kvality plazmidovej DNA | Koncentrácia/purežnosť | Ultraviolettá (UV) spektrofotometria | 1-2 |
Konformácia plazmidu | Elektroforeza v Agarózovom Gele (AGE) | ||
Kapilárna elektroforeza (CE) - voliteľná | |||
Identifikácia plazmidu | Identifikácia obmedzovacích enzymov/AGE | ||
Kontrola kvality circRNA | Koncentrácia/purežnosť | Ultraviolettá (UV) spektrofotometria | - |
Čistota | Elektroforeza v agárovom geľovi (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC - voliteľné | 1 | ||
Kontrola kvality circRNA-LNP | Účinnosť enkapsulácie | Metóda RiboGreen | 1 |
Veľkosť častíc | Dynamické rozptyľovanie svetla (DLS) | 1 | |
Index polydisperzity | Dynamické rozptyľovanie svetla (DLS) | 1 | |
Zeta potenciál | Dynamické rozptyľovanie svetla (DLS) | 1 | |
Test účinnosti založený na bunkách | Transfekcia buniek | Pripájanie buniek, transfekcia buniek | 4 |
Detekcia cieľovej proteíny | Fluorescenčné pozorovanie, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Transfekovali sme do buniek 293T zvýšenú zelenú fluorescenčnú beltku circRNA (eGFP circRNA), mCherry circRNA, luciferásovú circRNA a detekovali sme cieľovú proteínu pomocou fluorescencie, luminescentného alebo farebného signálu, western blot (WB), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).
Testy účinnosti circRNA vzoriek založené na bunkách od Yaohai Bio-Pharma