V procese prípravy in vitro transkripcie (IVT) mRNA je potrebná linearizovaná plazmidová DNA ako transkripčný templát pre IVT pomocou T7 RNA polymerázy. Vysokokvalitná plazmidová DNA je rozhodujúca pre in vitro transkripciu.
Na základe servisnej platformy pre prípravu zrelých plazmidov môže Yaohai Bio-Pharma ponúknuť službu prípravy linearizovanej plazmidovej DNA s vysokou čistotou a vysokým štandardom na dosiahnutie účinnej IVT transkripcie.
Podrobnosti o službách
| Proces | Voliteľná služba | Detaily služby | Dodacia lehota (pracovný deň) |
| Príprava kruhového plazmidu | Syntéza génov | Génová syntéza (tretej strany) | 7-10 |
| Plazmidová amplifikácia | Plazmidová amplifikácia | 2 |
| Extrakcia plazmidu |
| Linearizovaná príprava plazmidov | Linearizácia a čistenie plazmidu | Linearizácia plazmidu | 1 |
| Linearizácia Purifikácia DNA |
| Kontrola kvality plazmidovej DNA | Koncentračná čistota | Ultrafialová (UV) spektrofotometria | 1-2 |
| Plazmidová konformácia | Elektroforéza na agarózovom géli (AGE) |
| Kapilárna elektroforéza (CE) - voliteľná |
| Identifikácia plazmidu | Identifikácia reštrikčného enzýmu/ AGE |
Čo robíme:
- Plazmid šablóny voľného strihu
Flexibilný výber metód linearizácie
Optimalizácia metód extrakcie a purifikácie DNA na dosiahnutie vysokej miery výťažnosti.
Prísne štandardy riadenia procesov s mierou superhelikálnej konformácie vzoriek plazmidov pre výskum nad 80 %.
- Proces vyspelej platformy
Vysoko štandardná a vysoko účinná príprava plazmidov a služby kontroly kvality na splnenie experimentálnych potrieb.
Prípadová štúdia
Ak vezmeme ako príklad produkt mRNA_luciferázy z katalógu Yaohai Bio-Pharma, vzorka plazmidu templátu transkripcie (stupeň výskumu) má superhelikálny pomer viac ako 90 %, linearizačný pomer blízky 100 % a následný transkripčný pomer až 1:200 ( linearizovaná plazmidová DNA:mRNA).
mRNA_luciferáza získaná prípravou linearizovaného plazmidu ako templátu sa transfekuje do buniek 293T a reakčná aktivita enzým-substrát sa hodnotí 24 hodín po transfekcii.
Možno detegovať zrejmý signál silnej luciferázovej aktivity, tj luciferázový proteín je exprimovaný efektívne, čo naznačuje, že čistota transkripčného templátu môže plne uspokojiť požiadavku vysokokvalitnej prípravy mRNA.
Skúška pomeru supercoiled plazmidu
Validácia expresie mRNA luciferázy in vitro
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
