V procese prípravy in vitro transkripcie (IVT) mRNA sa vyžaduje linearizovaná plazmidová DNA ako transkripčná šablóna pre IVT s pomocou polymerázy T7 RNA. Vysoko kvalitná plazmidová DNA je kľúčová pre in vitro transkripciu.
Na základe zralého platformového služobníctva pre prípravu plazmidov môže Yaohai Bio-Pharma ponúkať služobu prípravy linearizovanej plazmidovej DNA vysoké čistoty a vysokého štandardu na dosiahnutie efektívnej transkripcie IVT.
Proces | Voliteľná služba | Podrobnosti služby | Doba dodania (pracovné dni) |
Príprava kruhového plazmidu | Syntéza genu | Syntéza genu (tretia strana) | 7-10 |
Amplifikácia plazmidu | Amplifikácia plazmidu | 2 | |
Extrákcia plazmidu | |||
Príprava lineárneho plazmidu | Linearizácia a čistenie plazmidu | Linearizácia plazmidu | 1 |
Čistenie linearizovaného DNA | |||
Kontrola kvality plazmidovej DNA | Koncentrácia čistoty | Ultraviolettá (UV) spektrofotometria | 1-2 |
Konformácia plazmidu | Elektroforeza v Agarózovom Gele (AGE) | ||
Kapilárna elektroforeza (CE) - voliteľná | |||
Identifikácia plazmidu | Identifikácia reštačným enzymom / AGE |
Prispôsobiteľný výber metód linearizácie
Optimalizácia metód extrakcie a čistenia DNA s cieľom dosiahnuť vysoké úspešnosť obnovy.
Prísne štandardy riadenia procesu, pričom stupeň superhelikálneho konformácie plazmidových vzoriek pre výskum je viac ako 80 %.
Vysoké štandardy a efektívne služby prípravy plazmidov a kontroly ich kvality na splnenie potrieb experimentov.
Použitím katalógu mRNA_luciferase spoločnosti Yaohai Bio-Pharma ako príkladu má transkripčný šablonový plazmidový vzorek (výskumná kategória) superhelikálny pomer vyšší ako 90 %, lineárny pomer blízky 100 % a nasledujúci transkripčný pomer až 1:200 (lineárna plazmidová DNA:mRNA).
MRNA_luciferase získaná pomocou linearizovaného plazmu ako šablony je transfekovaná do buniek 293T a aktivita enzym-substrátnej reakcie je vyhodnotená 24 hodiny po transfekcii.
Je zjavný silný signál aktivity luciferázy, t.j., protein luciferázy je účinně vyjadrený, čo naznačuje, že čistota transkripčného šablónu môže plne spokojniť požiadavky na prípravu kvalitnej mRNA.
Analýza pomeru superzakriveného plazmidu
Overenie expresie mRNA luciferázy in vitro