Význam výberu štamu
Výber vhodných hostiteli je nevyhnutný pre vývoj CMC biologic, čo určuje kvalitu a konzistenciu produkcie a výrobného procesu. Priamy cieľ výberu hostiteľa je poskytnúť kandidátsku primárnu bunkovú banku (PCB) s vysokou úrovňou expresie a vysokou stabilitou v oblasti pasážnej stability a stability pri ukladaní. Výber vhodného hostiteľa je nevyhnutný z dvoch hlavných dôvodov:
- Po prvé, vybrať mikrobiálny hostiteľ s vysokou úrovňou expresie. Existuje viacero komerčne dostupných štámov, ktoré sa používajú na expresiu rôznych typov bílkovín, ako sú toxické bílkoviny, rozpustné bílkoviny alebo eukaryotické bílkoviny.
- Za druhé, testovanie hospodára s genetickou stabilitou. Testovanie genetnej stability je kľúčovým bodom po celý životný cyklus výroby. Odporúča sa, aby vysoká genetická stabilita bola považovaná za ďalšiu kľúčovú charakteristiku vhodného štamu.
Kľúčové slová: výber mikrobiologického štamu, testovanie mikrobiologického štamu, vysokoúrovňové testovanie bakterií alebo kvasinky, testovanie vysoko produkujúcich štamov, testovanie vysoce stabilných štamov, testovanie geneticky stabilných štamov Aplikácia: ľudska medicína, veterinárna medicína, očká, syntetická biológia, rekombinantné veľké molekulové biologické látky, biologické reagenty
Služby testovania štamu Yaohai Bio-Pharma
Využívajúc viac ako 10 rokov skúseností z CDMO v oblasti mikrobiálnych biologických látek, podporujeme vývoj a výrobu rôznych veľkých molekúl, vrátane rekombinantných subunitných vakcín, viródnosnáh častíc (VLP), hormónov (inšulín, GLP-1, rastový hormón), cytokínov (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), rastových faktorov (EGF, FGF, NGF), nanotela/Singl-doménové antitela (sdAbs), enzymov atď.
Nashromžadali sme si bohaté skúsenosti v vybere rôznych typov plazmidových vektorov a mikrobiálnych hostiteli, vrátane baktérií Escherichia coli (E. coli), a kvasinkami Pichia pastoris (P. pastoris), Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae), Hansenula polymorpha (H. polymorpha). Môžeme nájsť najlepší expresný systém pre vaše jedinečné biologické látky.
Zbierame rôzne mikrobiálne hostiteľov s jasnymi zdrojmi a štandardným CoA, vrátane E.Coli baktérialneho expresného systému a expresného systému droždiev.
Podrobnosti služby
|
Služby
|
Podrobnosti služby
|
Minimálny časový rámec/Den
|
Výstupy
|
|
Vytvorenie štamu (E. coli)
|
Transformácia plazmidu (viacero hostiteľov)
|
5
|
COA komerčných hostiteľov, správa o vytvorení štamu
|
|
Verifikácia PCR
|
|
Čistenie štamu
|
|
Konzervácia štamu
|
|
Vytvorenie štamu (droždie)
|
Príprava kompetentných bunk droždiev
|
10
|
|
Linearizácia plazmidu
|
|
Elektrotransformácia
|
|
Test odolnosti/nedostatku výživy
|
|
Čistenie štamu
|
|
Konzervácia štamu
|
|
Výber vhodného hostiteľa
|
Extrákcia DNA plazmidu alebo genomu
|
15-20
|
Proces výberu hostiteľa COA inžinierskych štammov
|
|
Verifikácia PCR, digestia reštrikčnou enzymom
|
|
Sekvencovanie cieľového genu
|
|
Výber hostiteľov s vysokou expresiou
|
|
Výber hostiteľov s genetickou stabilitou
|
|
Konzervácia štamu
|
Prípadová štúdia<br>
Vhodný hostiteľ zvyšuje úroveň expresie proteínu 2,5 krát.
Dostali sme za úlohu vyvinúť vysoko produkujúci E. coli štrám. A vyskúšali sme tri typy komerčných E. coli hostiteľov, na základe vlastností cieľového proteínu. Ukázalo sa, že štrám S1-1 a S1-2 (Obrázok A: Stopa 1,2) zvýšil úroveň proteínu na 3,5 krát viac než počiatočný štrám klienta (Obrázok A: Stopa 3).
Okrem toho štrám S1-1 ukázal vysokú genetickú stabilitu (Obrázok B), a bol považovaný za kandidátsky štrám pre primárne bunkové banky (PCB).
Charakteristiky našich služieb
Dokázaná expertiza s rôznymi mikrobiálnymi hostiteľmi, napr. E. coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; P. pastoris SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink štrám1/2/3/4; S. cerevisiae a H. polymorpha .
Máme skúsenosti s E. coli sekreciou periplazmatickou, rozpustnou a expresiou inklúziových telies, ako aj expresiou kvasinky intracelulárne alebo sekretérne. Nepridávame žiadne antibiotiká alebo pridávame antibiotiká podľa regulačného vedenia.
Vytvoríme platformu pre vysokopriečnostné testovanie na vyšetrenie výkonných a stabilných štrien z viac ako stoviek kandidátskych štrien.
Je zabezpečené, že proces inžinierskeho návrhu a vyšetrovania štrien je sledovateľný podľa Dobrého manažmentu údajov a záznamov.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
