Deamidácia bočných reťazcov glutaminu a asparaginu je bežnou úpravou v kontexte vplyvu na vlastnosti biologických liečiv. Deamidácia môže nastat aj v reziduách glutaminu, ale obvykle v mnohem nižšom stupni. Rýchlosť deamidácie sa ovplyvňuje teplotou, pH, miestnou štruktúrou proteínu a okolitými aminokyselinami.
Yaohai BioPharma ponúka služby testovania deamidácie aminokyselín, ktoré vám umožňujú zistiť deamidáciu aminokyselín pomocou kapalnej chromatografie s massovou spektrometriou (LC-MS).
Boli sme zapojení do charakterizácie štruktúry proteínov rôznych veľkých molekúl, vrátane rekombinantných podjednotkových vakcín, Nanotelesiel/VHHs/Jednodoménových antitela (sdAbs), Fragmencov antitela, Hormónov/Peptidov, Cytokinov, Rastových faktorov (CF), Enzymov, Kollagenov atď.
Regulačné požiadavky pre deamidáciu aminokyselín
Podľa smerníc ICH Q6B môžu byť detegované a charakterizované deamidované formy chromatografickými, elektroforetickými a/alebo inými príslušnými analytickými metódami.
Analytické metódy
| Analýza |
Metódy |
| Deamidácia |
Kapalinová chromatografia-maspektrometria (LC-MS) |
Procedúry
napr., deamidácia kyseliny asparaginovej
1. Enzymatická digestia
2. LC-MS v podmienkach vysokoefektívnej kapalinovej chromatografie (HPLC)
3. Analýza údajov
Deamidácia asparaginu prebieha cez medziprodukt sucinimid (Suc), ktorý je citlivý na racemizáciu a hydrolyzu, čo viedlo k vytvoreniu štyroch izomerov Asp, vrátane L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp a D-IsoAsp.
Teoreticky môže deamidácia glutaminu vygenerovať štyri odpovedajúce izomery glutamickej kyseliny prostredníctvom procesu podobného deamidácii asparaginu.
Vysoko rozlišujúca hmotnostná spektrometria ľahko identifikuje rozdiel v hmotnosti 1 Da medzi peptidmi obsahujúcimi Asn/Gln a ich príslušnými deaminovanými protipolohami Asp/Glu.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
