Rekombinantné proteíny často zaznamenávajú oxidáciu exponovaných bočných reťazcov aminokyselín, ako je tryptofán (Trp) a metionín (Met), čím sa menia fyzikálno-chemické vlastnosti proteínov. Tieto zmeny môžu následne prispieť k zmene biologických funkcií postihnutých proteínov, ako je strata väzby, zníženie enzymatickej aktivity, neočakávane rýchly klírens. Proteíny sú dôležitými cieľmi oxidačných reakcií, pretože rýchlo reagujú s oxidantmi a sú bohaté na bunky, extracelulárne tkanivá a telesné tekutiny.
Preto je monitorovanie oxidácie proteínov rozhodujúce pre úspešný biofarmaceutický vývoj.
Yaohai Bio-Pharma ponúka službu analýzy oxidácie aminokyselín, ktorá vám umožňuje určiť oxidáciu aminokyselín pomocou kvapalinovej chromatografie-hmotnostnej spektrometrie (LC-MS).
Boli sme zapojení do proteínovej štrukturálnej charakterizácie rôznych veľkých molekúl, vrátane rekombinantných podjednotkových vakcín, nanobodies/VHH/jednodoménové protilátky (sdAbs), fragmenty protilátok, hormóny/peptidy, cytokíny, rastové faktory (GF), enzýmy, kolagény, atď.
Regulačné požiadavky na oxidáciu aminokyselín
Podľa smerníc ICH Q6B možno oxidované formy detegovať a charakterizovať chromatografickými, elektroforetickými a/alebo inými relevantnými analytickými metódami (napr. vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou (HPLC), kapilárnou elektroforézou, hmotnostnou spektroskopiou, cirkulárnym dichroizmom).
Analytické metódy
| Analýza |
Metódy |
| Oxidácia aminokyselín |
LC-MS, vysokoúčinná kvapalinová chromatografia s reverznou fázou (RP-HPLC) alebo hydrofóbna interakčná chromatografia Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HIC-HPLC) a hmotnostná spektrometria |
Analytické postupy
1. Príprava vzorky
2. LC-MS
3. Analýza dát
Tryptofánové (Trp) zvyšky sú obzvlášť náchylné na oxidáciu kvôli vysokej reaktivite aromatického indolu s reaktívnymi formami kyslíka. Oxidácia Trp vyžaduje určitú expozíciu zvyškov Trp, ktoré sú normálne pochované v trojrozmernej štruktúre proteínu.
Keď sú však zvyšky Trp oxidované, môžu sa premeniť na rôzne produkty s veľmi odlišnými vlastnosťami od pôvodného Trp. Najbežnejšia cesta oxidácie Trp zahŕňa tvorbu N-formylkinurenínu (hmotnostný rozdiel: +32).
Ďalšou bežne oxidovanou aminokyselinou je metionín. Atóm síry vo zvyšku Met môže prijať buď jeden alebo dva atómy kyslíka, čo vedie k tvorbe sulfoxidu (hmotnostný rozdiel: +16) alebo sulfónu (hmotnostný rozdiel: +32). Táto modifikácia je relatívne bežná kvôli typicky vysokej povrchovej expozícii Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
