Údaje z mapovania peptidov na báze kvapalinovej chromatografie-hmotnostnej spektrometrie (LC-MS) poskytnú veľké množstvo informácií o primárnej štruktúre a štruktúre natívnych a rekombinantných proteínov vyššieho rádu, vrátane pokrytia sekvencií aminokyselín, posttranslačných modifikácií (PTM, napr. glykozylácia). , oxidácia, deamidácia), disulfidové väzby atď.
Yaohai Bio-Pharma ponúka služby analýzy peptidového mapovania pre váš cieľový proteín pomocou LC-MS, aby sa urýchlil váš výskum proteínovej štruktúry.
Boli sme zapojení do proteínovej štrukturálnej charakterizácie rôznych veľkých molekúl, vrátane rekombinantných podjednotkových vakcín, nanobodies/VHH/jednodoménové protilátky (sdAbs), fragmenty protilátok, hormóny/peptidy, cytokíny, rastové faktory (GF), enzýmy, kolagény, atď.
Regulačné požiadavky na mapovanie peptidov
Smernica ICHQ6B odporúča: „Selektívna fragmentácia produktu na diskrétne peptidy sa vykonáva pomocou vhodných enzýmov alebo chemikálií a výsledné peptidové fragmenty sa analyzujú pomocou HPLC alebo iného vhodného analytického postupu. Peptidové fragmenty by sa mali identifikovať pokiaľ možno pomocou techník, ako je analýza zloženia aminokyselín, N-koncové sekvenovanie alebo hmotnostná spektrometria (MS). Peptidové mapovanie účinnej látky alebo liekového produktu (DP) pomocou vhodne overenej metódy je metóda často používaná na potvrdenie požadovanej štruktúry produktu na uvoľnenie šarže.
Analytické metódy
| Analýza |
Metódy |
| Peptidové mapovanie |
Digescia proteáz a kvapalinová chromatografia-hmotnostná spektrometria (LC-MS) |
Analytický postup
1. Redukcia a alkylácia
Účelom je znížiť disulfidové mostíky a blokovať generovaný voľný tiol. Redukcia disulfidových mostíkov pomáha otvoriť proteínovú štruktúru, čo zefektívňuje proteolytické trávenie. Tento krok tiež preruší mostíky medzi reťazcami v prípade viacreťazcových proteínov, ktoré majú disulfidové mostíky spájajúce reťazce (napr. monoklonálne protilátky，mAb).
2. Trávenie proteínu pomocou enzýmov
Účelom je rozložiť proteín na peptidy. Enzýmy sme zvolili na základe teoretickej sekvencie proteínu a znalosti teoretického trávenia proteínu enzýmami. Výber enzýmov týmto spôsobom by mal viesť k najlepšej analýze mapovania peptidov.
3. Analýza natrávených peptidov Použitie on-line vysokovýkonnej kvapalinovej chromatografie s reverznou fázou s ultrafialovou (UV) a elektrosprejovou hmotnostnou spektrometrickou detekciou (LC/ES-MS).
Separácia peptidov na základe polarity pomocou LC (LC s reverznou fázou)
Keď sa peptid eluuje z LC kolóny, hmotnostný spektrometer vygeneruje informáciu o hmotnosti spolu s informáciou o fragmentových iónoch, čo nám umožňuje určiť sekvenčnú informáciu. Informácie o sekvencii používame na potvrdenie identity peptidu a poskytnutie primárnych informácií.
Môžeme tiež generovať informácie o fragmentácii z peptidov, keď vstupujú do zdroja hmotnostného spektrometra z LC kolóny. V závislosti od požiadaviek štúdie ide buď o selektívnu LC-MS/MS, alebo o neselektívnu, ktorú možno považovať za formu tandemovej SM.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
