Dáta z peptidového mapovania na báze kapalnej chromatografie a hmotnostnej spektrometrie (LC-MS) poskytnú veľké množstvo informácií o primárnej a vyššej štruktúre natívnych a rekombinantných bílkovín, vrátane pokrytia aminokyselinového radu, posttranslačných úpravách (PTMs, napr. glykosylácia, oxidácia, deamidácia), disulfidových väzách atď.
Yaohai Bio-Pharma ponúka služby analýzy peptidového mapovania pre váš cieľový proteín pomocou LC-MS, aby sa urychlilo vaše výskumy štruktúry proteínov.
Boli sme zapojení do charakterizácie štruktúry proteínov rôznych veľkých molekúl, vrátane rekombinantných podjednotkových vakcín, nanotěles/VHHs/jednodoménových antitela (sdAbs), fragmentov antitela, hormónov/peptidov, cytokínov, rastových faktorov (GF), enzymov, kolagénov atď.
Regulačné požiadavky na peptidové mapovanie
ICHQ6B smernica odporúča: „Vybrané rozdrobenie produktu na diskrétne peptidy sa vykonáva pomocou vhodných enzymov alebo chemikálií a výsledné peptidové fragmenty sa analyzujú pomocou HPLC alebo iného vhodného analytického postupu. Peptidové fragmenty by mali byť identifikované tak ďaleko ako je to možné pomocou techník ako analýza aminokyselínového zloženia, N-koncové sekvenovanie alebo hmotnostná spektrometria (MS). Peptidové mapovanie aktívnej látky alebo liekového produktu (DP) pomocou vhodne overeného metódy je často používaná metóda na potvrdenie požadovanej štruktúry produktu pre uvoľnenie dávky.“
Analytické metódy
| Analýza |
Metódy |
| Mapovanie peptidov |
Proteázy Digestia a kapalná chromatografia - hmotnostná spektrometria (LC-MS) |
Analytický postup
1. Redukcia a alkylovanie
Cieľom je znížiť disulfidové mosty a blokovať vzniklé voľné thiolové skupiny. Redukcia disulfidových mostov pomáha otvoriť proteínovú štruktúru, čo robí proteolýticku digestiu efektívnejšou. Tento krok tiež preruší mosty medzi reťazcami v prípade viaceroreťazcových proteínov s disulfidovými mostami spojujúcimi reťazce (napr. monoclonálne antitela, mAbs).
2. Digestia proteínu enzymami
Cieľom je rozložiť proteín na peptidy. Vyberame enzymy na základe teoretického postupu proteínu a poznatkov o teoretickej digestii proteínu enzymami. Výber enzymov sa vykoná tak, aby viedol k najlepšej peptidovej mapovacej analýze.
3. Analýza predtravených peptidov Použitím On-line reverznej fázy-Vysokoučinnostnej kapalinnej chromatografie s Ultraviolettovým (UV) a Elektrospray-Masspektrometrickým detekovaním (LC/ES-MS).
Separácia peptidov podľa ich polárnosti pomocou LC (reverzná fáza-LC)
Keď peptid vytieká z LC kolónky, spektrometr hmotnosti vygeneruje hmotnostné informácie spolu s informáciami o fragmentových ionoch, čo nám umožňuje určiť sekvenčné informácie. Používame tieto sekvenčné informácie na potvrdenie identity peptidu a poskytnutie primárnych informácií.
Môžeme tiež vygenerovať informácie o fragmentácii z peptidov, keď vstupujú do zdroja spektrometra hmotnosti z LC kolónky. Podľa požiadaviek štúdie ide buď o selektívne LC-MS/MS alebo o neoselektívne, čo môže byť považované za formu tandemovej MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
