N-glykosylačná stránka okupácie je fyziologickou charakteristikou glykoproteínov a hlavne vyprodukuje N-glykan. Analýza služby N-glykosylačnej stránky okupácie od Yaohai Bio-Pharma sa uskutočňuje prostredníctvom trávenia, uvoľnenia, obohacovania a analýzy pomocou kapalinovej chromatografie-elektrosprájovej ionizácie hmotnostnej spektrometrie-hmotnostnej spektrometrie (LC-ESI-MS/MS).
Boli sme zapojení do charakterizácie štruktúry proteínov rôznych veľkých molekúl, vrátane rekombinantných podjednotkových vakcín, nanotěles/VHHs/jednodoménových antitela (sdAbs), fragmentov antitela, hormónov/peptidov, cytokínov, rastových faktorov (GF), enzymov, kolagénov atď.
Regulačné požiadavky pre N-glykosylačnú stránku okupácie
Podľa smernice ICH Q6B, „pre glykoproteíny sa určí sacharidový obsah (neutrálnych cukorov, aminocukorov a sialových kyselín). navyše sa analyzujú štruktúry sacharidových reťazcov, oligosacharidový vzor (anténny profil) a miesto glykosylácie polypeptidového reťazca v najväčšej možnej miere.“
Analytická metóda
| Analýza |
Metódy |
| Okupovanosť lokality N-glykosylácie |
LC-MS po deglykosylácii a proteáse trávení |
Procedúry
1. Trávenie bílkovín na vytvorenie malých peptidových zlomkov.
2. Uvoľnenie N-glykanov pomocou endoglicosidázu H alebo PNGase F. Endoglicosidáz H preruší väzbu medzi dvoma GlcNAc reziduami v jadre N-spojených glykanov, zatiaľ čo PNGase F je glykoamidáz, ktorá preruší väzbu medzi GlcNAc a Asn, uvoľňujúc celý cukrový reťazec a prevádzajúc Asn na Asp s nárastom hmotnosti o 1-Da.
3. Obohacovanie N-glycopeptidov pomocou HILIC (Hydrofilická Interakčná Kapalná Chromatografia)
4. Analýza okupovanosti N-spojených glykosylačných miest pomocou LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
