Obsadenie miesta N-glykozylácie je fyziologickým znakom glykoproteínov a produkuje hlavne N-glykán. Služba analýzy obsadenosti N-glykozylačného miesta spoločnosti Yaohai Bio-Pharma sa vykonáva prostredníctvom trávenia, uvoľňovania, obohatenia a analýzy pomocou kvapalinovej chromatografie-elektrosprejovej ionizačnej hmotnostnej spektrometrie-hmotnostnej spektrometrie (LC-ESI-MS/MS).
Boli sme zapojení do proteínovej štrukturálnej charakterizácie rôznych veľkých molekúl, vrátane rekombinantných podjednotkových vakcín, nanobodies/VHH/jednodoménové protilátky (sdAbs), fragmenty protilátok, hormóny/peptidy, cytokíny, rastové faktory (GF), enzýmy, kolagény, atď.
Regulačné požiadavky na obsadenie miesta N-glykozylácie
Podľa smernice ICH Q6B „pre glykoproteíny sa určuje obsah sacharidov (neutrálne cukry, aminocukry a kyseliny sialové). Okrem toho sa v najlepšom možnom rozsahu analyzuje štruktúra sacharidových reťazcov, oligosacharidový vzor (anténny profil) a glykozylačné miesto (miesta) polypeptidového reťazca.
Analytická metóda
| Analýza |
Metódy |
| Obsadenie miesta N-glykozylácie |
LC-MS po štiepení deglykozylázou a proteázou |
Postupy
1. Proteínové štiepenie proteínov na vytvorenie malých peptidových fragmentov.
2. Uvoľňovanie N-glykánu pomocou endoglykozidázy H alebo PNGázy F. Endoglykozidáza H štiepi väzbu medzi dvoma zvyškami GlcNAc v jadre N-viazaných glykánov, zatiaľ čo PNGáza F je glykoamidáza, ktorá preruší väzbu medzi GlcNAc a Asn, čím sa uvoľní celá cukrový reťazec a premenou Asn na Asp s nárastom hmotnosti o 1-Da.
3. Obohatenie N-glykopeptidom prostredníctvom HILIC (hydrofilná interakčná kvapalinová chromatografia)
4. Analýza obsadenia N-viazaného glykozylačného miesta pomocou LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
