mRNA sa široko používa pri štúdiu funkcií génu alebo białok. Zároveň je bežná pri vývoji prevencie a liečivých biologic. Jako bežná syntetická stratégia pre RNA molekuly nám in vitro transkripcia (IVT) umožňuje získať prispôsobené transkripty efektívne.
Yaohai Bio-Pharma vyvinula sústavu technológií na syntézu mRNA na poskytovanie kvalitnejho RNA, ako je napríklad dizajn a optimalizácia sekvencií, IVT, čistenie, lyofilizácia a encapsulácia lipidovými nanocasticami (LNP). Všetky produkty sú uvoľňované za prísnych kvalitných kontrolných (QC) štandardov.
S výbuchom pandémie COVID-19 v roku 2020 sa mRNA technológia rozvinula obrovským tempom a jej súvisiace výskumy a aplikácie získali neprekvapené rozvoj, vrátane preventívnych vakcín proti infekčným nemocam, liečivých onkológickych vakcín a liekov, liečby tumorov, náhradnej terapie proteínov, regeneratívnej medicíny a bunkovej a genovej terapie (CGT).
mRNA očkovanie | terapeutika mRNA |
|
Proces | Voliteľná služba | Podrobnosti služby | Doba dodania (pracovné dni) | Výsledok |
návrh a optimalizácia sekvencie mRNA | Návrh a optimalizácia kódovacích sekvencií | Navrh CDS sekvencie a optimalizácia kodónov | 1-3 | Sekvenčný súbor |
Návrh a optimalizácia nekódovacích postupností | Návrh a optimalizácia UTR, polyA postupností | |||
Príprava plazmidného transkripčného šablónu | Príprava rekombinantného plazmidu | Syntéza genu | 7-10 | |
Amplifikácia a extrakcia plazmidu | 4 | |||
Linearizácia a čistenie plazmidu | ||||
in Vitro transkripcia mRNA | Kotranskripčné uzavretie (jednopásmove metóda) | Transkripcia in vitro (IVT) / Kapanalog | 1-2 | N/A |
Modifikácie nukleotidov (modifikácie UTP/CTP) | ||||
Odstránenie DNA šablóny (DNase I) | ||||
Enzymatické zakončenie (dvojstupňový proces) | IVT | 2-3 | ||
Modifikácie nukleotidov (modifikácie UTP/CTP) | ||||
Odstránenie DNA šablóny (DNase I) | ||||
čistenie mRNA (precipitácia lithií chlóridom / magnetické častice) | ||||
Enzymatické zakončenie | ||||
čistenie mRNA | Konvenčná metóda čistenia | Precipitácia lithií chlóridom | 1 | lieková látko mRNA |
Čistenie pomocou magnetických častíc | ||||
Schéma čistenia chromatografického stĺpca | Kombinácia viacerých chromatografických metód | 1-2 | ||
Výmena bufferu | Ultrafiltrácia | 1 | ||
liofilizácia mRNA | Lyofilizácia | Predzámrenie | 2-3 | lyofilizovaný prášok mRNA |
Prvá sušenie (sublimácia) | ||||
Druhé sušenie (dezorpčné) | ||||
encapsulation mRNA | LNP Encapsulation | LNP Encapsulation | 2-3 | mRNA-LNP Liečebný produkt |
Koncentrácia a výmena buffera | ||||
analýza kvality mRNA | lieková látko mRNA / lyofilizovaný prášok | Koncentrácia, čistota | 1 | Skúšobná správa |
Integrita, účinnosť zakončenia, distribúcia polyA chvostu | 2-5 | |||
liekový produkt mRNA-LNP | Účinnosť enkapsulácie | 1 | ||
Veľkosť časticí a ich rozdelenie | ||||
Povrchový náboj | ||||
overenie expresie mRNA | hodnotenie bunk 293T | Pospávanie buniek | 4 | |
Dočasné transfekcie buniek | ||||
Observácia fluorescenčného signálu | 1-3 | |||
Západosmerný prenos (WB) / Imunoenzymová aspirovaná metóda (ELISA) |
5' Zakončenie |
▪ Nekapované ▪ Cap0, spoločne kapované ▪ Cap1, spoločne kapované ▪ Kap1, enzymatické uzavretie |
5’ UTR/3’ UTR |
▪ Prirodzená UTR sekvenčnosť ▪ Mutantná/Inžinierska UTR sekvenčnosť |
3' PolyA chvost |
▪ 100A ~120A Chvost (doporučený) ▪ Segmentovaný polyA chvost ▪ Iné vlastné chvoste |
Upravené nukleozydy |
▪ Neupravené bazy ▪ Pseudouridin (Ψ) ▪ N1-Methylpseudouridin (N1Ψ) ▪ 5-methylcytosín (m5C) ▪ 5-methyluridin (m5U) ▪ 5-methoxyuridin (5moU) ▪ 2-thiouridin (s2U) ▪ 2′-O-methyl-U ▪ Iné úpravy |
Integrovaný pracovný postup
Poskytujeme radu služieb od návrhu sekvencii na začiatku po príprave mRNA, kvalitnej kontrole a overeniu výrazu na konci.
Medzinárodné inovatívne navrhovanie a optimalizácia postupu
Profesionálne navrhovanie a optimalizácia mRNA sérii podporujú efektívne výrazné mRNA.
Rozmanité úpravy nukleotidov
Efektívne zvyšujú výraz mRNA a znížia nevhodné imunitné reakcie mRNA.
Zrelá čistiacia platforma
Kombinovaním konvenčnej a vlastne navrhovanej metódy čistenia sa získavajú vzorky mRNA s vysokou čistotou.
Kompletná platforma QC
Bohatstvo možností QC, ktoré spĺňajú požiadavky bežných testov, ako je koncentrácia, čistota A260/280 a integrity, ako aj vysoke požiadavky na kontrolu kvality, ako je účinnosť zakončenia/položky polyA.
Rýchle dodanie
Vykonalná mRNA môže byť dodaná najneskôr za 7 dní, okrem externého syntézy sekvencie.