Čo sa týka masovej produkcie mRNA, in vitro transkripcia (IVT) je efektívnejšia a zrelšia metóda. IVT reakcia využíva linearizovanú plazmidovú DNA obsahujúcu promótor T7 ako templát a mRNA sa syntetizuje s nukleozidtrifosfátmi (NTP) ako substrátmi v prítomnosti T7 RNA polymerázy.
Nukleotidová modifikácia je prelomom vo výskume mRNA, kde sú nemodifikované mRNA molekuly rozpoznávané intracelulárnymi RNA senzormi, aby sa aktivovala vrodená imunita. Čo sa týka imunogenicity mRNA in vivo a účinnosti translácie, proces IVT zvyčajne využíva určité druhy modifikovaných NTP a bežné modifikované nukleotidy sú pseudouridín (Ψ), N1-metyl-pseudouridín (N1Ψ) a 5-metylcytozín (5mC).
In vitro transkripčný proces mRNA
Reakčný diagram in vitro transkripcie (IVT).
Podrobnosti o službách
Voliteľná služba |
Detaily služby |
Dodacia lehota (pracovný deň) |
In vitro transkripcia (IVT) |
IVT, in vitro transkripcia |
1 |
| Nukleotidové modifikácie (Ψ/N1Ψ/5mC atď.) |
| Odstránenie templátu DNA (DNáza I) |
Optimalizácia stavu IVT - voliteľná |
Návrh a optimalizácia komponentov reakcie IVT |
2-5 |
Čo robíme:
- Diverzifikované stratégie modifikácie nukleotidov
Zlepšite stabilitu mRNA a expresiu proteínu in vivo.
- Návrh a optimalizácia prísnych testov
Je možné dosiahnuť prípravu fragmentu mRNA až do 10 kb.
Optimalizáciou reakčných podmienok IVT je rýchlosť transkripcie až 1:200.
Prísna kontrola RNázy prostredníctvom experimentálneho prostredia a spotrebného materiálu môže účinne zabrániť degradácii mRNA.
Prípadová štúdia
Súčasný reakčný systém IVT je zhruba optimalizovaný pre syntetické systémy s dĺžkou približne 100 nt, nie pre mRNA ľubovoľnej dĺžky. Čím je sekvencia mRNA dlhšia, tým je jej transkripcia náročnejšia a tým náchylnejšia na degradáciu.
Na prípravu prispôsobených sekvencií mRNA s dĺžkou približne 10 kb spoločnosť Yaohai Bio-Pharma úspešne pripravila vysokokvalitné vzorky s vysokým transkripčným pomerom 1:135 a získala 135 μg pôvodne purifikovaných produktov mRNA po 1 μg linearizovaného plazmidu. bol transkribovaný in vitro prostredníctvom prísneho experimentálneho dizajnu, nepretržitej optimalizácie reakčných podmienok a prísnej kontroly RNázy.
Identifikácia mRNA (elektroforéza na agarózovom géli)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
