Všetky kategórie
ENEN
In vitro transkripcia a cirkulácia

In vitro transkripcia a cirkulácia

Domov >  IVT RNA  >  Vlastná syntéza RNA  >  Vlastná syntéza circRNA  >  In vitro transkripcia a cirkulácia

IVT RNA

In vitro transkripcia a cirkulácia

Čo sa týka dávkovej prípravy prekurzorov RNA, bežne používanou metódou je in vitro transkripcia (IVT). IVT reakcia využíva linearizovanú plazmidovú DNA obsahujúcu T7 promótor ako templát a syntetizuje RNA prekurzor s nukleozidtrifosfátmi (NTP) ako substrátom v prítomnosti T7 RNA polymerázy.

In vitro cyklizačné metódy zahŕňajú chemickú ligáciu, enzymatickú ligáciu a metódu permutovaného intrón-exónu (PIE). Chemická ligácia a enzymatická ligácia sú vhodné na cyklizáciu kratších RNA. Keď je fragment väčší ako 100 nt, rýchlosť cyklizácie sa výrazne zníži. Na rozdiel od toho nukleázová metóda založená na systéme PIE môže dosiahnuť cyklizáciu 8 kb sekvencií.

Pod katalýzou guanozíntrifosfátu (GTP) podlieha štruktúra PIE cyklizácii extra-intrónových sekvencií. V kombinácii s rozumnou stratégiou na zvýšenie miery cyklizácie môže Yaohai Bio-Pharma dosiahnuť cyklizáciu až 4 kb sekvencií s účinnosťou cyklizácie viac ako 80 %.

nedefinované

In vitro cyklizačná reakcia RNA prebieha takto:

Prekurzor RNA sa syntetizuje in vitro transkripciou a komponent PIE dokončí samozostrih za katalýzy GTP za vzniku circRNA.

nedefinované

Podrobnosti o službách
ProcesDetaily službyDodacia lehota (pracovný deň)
In vitro transkripcia a cirkuláciaPotvrdenie reakčného systému1-2
In vitro transkripčné a cyklizačné reakcie
štiepenie RNázou R
Optimalizácia reakcieZloženie reakcie, optimalizácia času2-5
Čo robíme:
    • Návrh a optimalizácia prísnych testov

Je možné dosiahnuť až 4 kb cyklizácie RNA.

    • Vysoká účinnosť cyklizácie

Miera cyklizácie viac ako 80 % sa dá dosiahnuť prostredníctvom racionálnej stratégie optimalizácie sekvencie.

    • Prísna kontrola RNázy

Prostredníctvom prísnej kontroly RNáz v experimentálnom prostredí a spotrebných materiáloch sa účinne predchádza degradácii RNA.

Prípadová štúdia

In vitro cyklizácia a obohatenie circRNA

Na základe systému PIE spoločnosť Yaohai Bio-Pharma optimalizovala sekvenciu circRNA s mierou cyklizácie viac ako 80 % pomocou elektroforézy na agarózovom géli (AGE). Použitím RNázy R na obohatenie circRNA výsledky elektroforézy na E-géli ukazujú, že lineárny prekurzor RNA je štiepený a po ďalšej purifikácii môže byť väčšina poškodenej circRNA odstránená. Čistiaci roztok je vyvinutý spoločnosťou Yaohai Bio-Pharma.

nedefinované

In vitro cirkulácia a obohatenie circRNA

Získajte bezplatnú cenovú ponuku

Dostať do kontaktu