Yaohai Bio-Pharma pripravuje circRNA na základe systému PIE (zarovnanie exónov a intrónov), ktorý sa spolieha na funkciu samozostrihu intrónov typu I na dosiahnutie cyklizácie RNA. Štruktúra PIE je navrhnutá pomocou génu T4 td alebo rybieho prekurzorového génu tRNA a usporiadanie je nasledovné:
RNA intrón a podporný exónový fragment sú rozdelené na dve časti (5' terminál a 3' terminál), kde 5' terminálna sekvencia je prenesená na koniec cieľovej sekvencie, 3' terminálna sekvencia je vložená do prednej časti cieľová sekvencia a sekvencia cieľového génu je vložená do stredu.
Za katalýzy GTP vedie štruktúra PIE k cyklizácii sekvencií iných ako intróny. V kombinácii s rozumnou stratégiou vylepšenia rýchlosti cyklizácie môže Yaohai Bio-Pharma dosiahnuť cyklizáciu sekvencií až do 4 kb s mierou cyklizácie vyššou ako 80 %.
Obrázok 1. In vitro cirkulácia circRNA na základe PIE systému
Podrobnosti o službách
| Proces | Voliteľná služba | Detaily služby | Dodacia lehota (pracovný deň) |
| Návrh a optimalizácia sekvencie circRNA | Návrh a optimalizácia kódovacích sekvencií | Zarovnanie sekvencií CDS Optimalizácia CDS kodónov | 1 |
| Návrh a optimalizácia nekódujúcich sekvencií | Návrh a optimalizácia sekvencií intrónov a exónov Návrh a optimalizácia homológnej sekvencie ramien Návrh a optimalizácia sekvencie rozperiek | 1-2 |
Spoločné stratégie pre návrh sekvencie mRNA
| Komponenty CircRNA | Biologické funkcie | Stratégie optimalizácie |
| Dvojkoncové intrónové a exónové sekvencie | Samozostrih intrónu katalyzovaný GTP na cyklizáciu sekvencií mimo intrónu. | Navrhnuté podľa génu T4 td alebo prekurzorového génu tRNA rybieho oleja. |
| Kódovanie | IRES | Vnútorné miesto rozpoznávania ribozómov, ktoré reguluje transláciu circRNA. | Skríning sekvencií vnútorného miesta vstupu ribozómu (IRES) z rôznych vírusových zdrojov, napr. EMCV, CVB3 zdrojov. |
| CDS | Oblasti kódujúce proteín, sekvencie kódujúce antigény, protilátky alebo iné funkčné proteíny. | Optimalizácia kodónov zvyšuje úroveň translácie; niektoré neoptimálne kodóny môžu hrať úlohu pri skladaní proteínov. |
| Nekódovanie | Nekódujúce sekvencie | Zacieľte miRNA alebo proteíny, aby ste uplatňovali génovú alebo proteínovú reguláciu. | Zacielenie na špecifické väzbové miesta pre miRNA alebo proteíny môže opakovať sekvencie väzbového miesta. |
Čo robíme:
- Optimalizovaný systém cyklizácie PIE Kombinácia s rozumnými optimalizačnými stratégiami na dosiahnutie miery cyklizácie viac ako 80 %;
- Špičkový tím pre optimalizáciu CDS Spolupráca s profesionálnym tímom pre algoritmy AI na dokončenie optimalizácie kodónov oblasti CDS;
- Zrelú a perfektnú procesnú circRNA možno dosiahnuť s vysokou účinnosťou cyklizácie, vysokou stabilitou a vysokou účinnosťou translácie.
Prípadová štúdia
Spoločnosť Yaohai Bio-Pharma uviedla na trh kontrolný produkt circRNA so zvýšeným zeleným fluorescenčným proteínom (eGFP), ktorý je založený na systéme PIE na dosiahnutie cyklizácie RNA.
Použitím konvenčného transfekčného činidla sa eGFP circRNA transfekuje do buniek 293T a eGFP (zelený) fluorescenčný signál možno detegovať po 24 hodinách, ktorý sa zosilní po 48 hodinách. Fluorescenčný signál možno stále detegovať na 7. deň a 14. deň po transfekcia.
In vitro validácia expresie eGFP circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
