Všetky kategórie
Príprava bielekovín bez tagu

Príprava bielekovín bez tagu

Bílkové tagy, ako fúzne partneři používané v technológiách rekombinantnej DNS, umožňujú efektívnu, jednopásmovú afinítu pre rôzne bílkoviny/peptidy s rôznymi vlastnosťami. Navzdory tejto dôležitej výhode môžu tagy ako exogénne aminokyseliny meniť štruktúru bílkovín a ich biologické funkcie. Preto sú neoznačené (beztagové) bílkoviny alebo peptidy viac preferované, aby sa zabezpečila bezpečnosť a účinnosť, osobitne v biofarmaceutickej oblasti. Rekombinantnému bílku s fúziovým tagom má malé možnosti získať povolenie od lekárskych/farmaceutických úradov.

Na základe mikrobiálneho výskumného a vývojového platformy pre biologické lieky ponúka Yaohai Bio-Pharma špeciálne služby na prípravu bílkovín bez tagu (Tag-free), ktoré sú zamerané na splnenie jedinečných cieľov pre výskum, vývoj a výrobu pre klinickú úžitok.

Kľúčové slová: produkcia bílkovín bez tagu, čistenie bílkovín bez tagu, príprava bílkovín na báze voľného tagu, expresia a čistenie bílkovín bez tagu, cieľová bílka vysoce voľná od tagu

Aplikácia: výskum ľudských liekov, vývoj veterinárnych liečiv, vývoj rekombinantných vakcín, produkcia rekombinantných veľkých molekulových biologickej liečiv

Náš mikrobiálny výskumný a vývojový platform

Máme skúsenosti v inžinierstve mikrobiálnych štrien, fermentácii a čistení produktov.

Baktérie: Escherichia coli (E. coli)

Kvasinka: Pichia pastoris (P. pastoris), Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae), Hansenula polymorpha (H. polymorpha)

Prispôsobené možnosti
Modalita Rekombinantný proteín
Výchozí materiály Génové sekveny, rekombinantné plazmidy alebo inžinierované štrany
Výstupy Vyčistenie: >80%, >85%, >90% Množstvo: 0.2~10 g (bude určené podľa projektu)
Výrazový systém a formovanie

E. coli exprese do periplazmatického priestoru, rozpúšťateľná a inklúzióve tela;

Výraz v kvasinkách - intracelulárne alebo sekretérny

Metódy analýzy Ultraviolettové (UV), asetát bicinchonínovej kyseliny (BCA), Bradford alebo Lowry na určenie množstva
Elektroforeza v polyakrylamidovom geľu so sodíkovou dodecylsulfátovou (SDS-PAGE) pre testovanie čistoty
Voliteľné: Western blot (WB), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), vysoko výkonná kapalinová chromatografia (HPLC)
Zostávajúce nečistoty Endotoxiny (voliteľné)
Podrobnosti služby

Služby

Podrobnosti služby

Minimálny časový rámec (pracovný deň)

Syntéza genu

Optimalizácia kodónov pre špecifického hostiteľa expresie

7~10 dní

Syntéza genu

Konštrukcia plazmidu/vektora

Klonovanie do plazmidu/vektora

2 dni

Transformácia plazmidu

Verifikácia polymerázou rečnou reakciou (PCR), digestia obmedzovacím enzymom, sekvenovanie génu

3 dni

Exprésia bieleka v E. coli

Transformácia plazmidu,

2 dni

Výživa v otáčajúcom sa fľaši

3 dni

fermentácia v mierke 7L, optimalizácia

4 dni \/ dávka

Čistenie bieleka bez tagu, optimalizácia

5~10 dní \/ dávka

Testovanie pomocou elektroforezy v polyacrylamidovom gеле so sodíkovou dodecylsulfátovou (SDS-PAGE)

Exprésia bieleka v kvasinkách

Príprava kvasinkových kompetentných buniek

4 dni

Lineárizácia plazmidu a elektrotransformácia

fermentácia v mierke 7L, optimalizácia

5 dní

Čistenie bieleka bez tagu, optimalizácia

7 dní / dávka

Čistenie bílkovín bez tagu

5~10 dní \/ dávka

Kontrola kvality pomocou SDS-PAGE

Ďalšie služby (voliteľné)
Dostaňte bezplatnú ponuku

Get in touch