Vývoj následného procesu

Mikrobiálne CDMO

Význam vývoja následných procesov (DSP).

Celý fermentačný bujón obsahuje cieľový proteín alebo plazmid, ako aj nečistoty súvisiace s produktom a procesom, napr. agregáty, substráty mikrobiálnych buniek, proteíny hostiteľskej bunky (HCP), DNA hostiteľskej bunky (HCD), endotoxín a antibiotiká.

Preto je kľúčové navrhnúť účinný DSP, purifikačný proces, aby sa odstránili určité nečistoty a vyrobili sa vysoko purifikované a vysokokvalitné liečivé látky. Okrem toho môže optimalizácia procesu čistenia pomôcť zvýšiť výťažnosť produktu, znížiť náklady a zlepšiť škálovateľnosť a reprodukovateľnosť procesu.

Kľúčové slová: vývoj procesu, optimalizácia a validácia, proces purifikácie, chromatografia, eliminácia nečistôt, odstraňovanie HCP, eliminácia HCD, odstraňovanie endotoxínu, denaturácia a refolding proteínov, zostava VLP, konjugácia

Použitie: Biofarmaceutický priemysel, humánna medicína, medicína zvierat, vakcína, rekombinantná biologika s veľkou molekulou, rekombinantná biologika, biologické činidlo

DSP riešenia Yaohai Bio-Pharma

Máme rozsiahle skúsenosti s izoláciou cieľových proteínov alebo plazmidov z komplexných matríc vývojom a optimalizáciou následného purifikačného procesu. Existujú rôzne typy jednotkových operácií vhodných na čistenie biologických látok, vrátane centrifugácie, filtrácie, homogenizácie, alkalickej lýzy, ultrafiltrácie, zrážania, denaturácie a opätovného skladania proteínov, chromatografie atď.

Naše dostupné služby vývoja čistenia zahŕňajú:

Vývoj celého purifikačného procesu od zberu buniek alebo supernatantu až po finálnu aktívnu zložku.
Optimalizácia procesu čistenia na základe nečistôt súvisiacich s produktom a procesom na zvýšenie kvality a bezpečnosti produktu, napr. HCP, HCD, endotoxín.
Definícia a optimalizácia kľúčových parametrov v jednej alebo viacerých jednotkových operáciách, vrátane lýzy buniek, filtrácie s tangenciálnym tokom, skríningu živice, chromatografie, denaturácie proteínov a opätovného skladania atď.
Optimalizácia procesu z hľadiska kvality, výnosu, obnovy, nákladov a škálovateľnosti.
Validácia následného purifikačného procesu.
Hodnotenie rozsahu parametrov na základe rizika a návrh experimentov (DoE) v modelovaní procesov.

Detaily služby

Štandardizované platformy na čistenie proteínov alebo plazmidov sú založené na viacerých surových purifikačných krokoch a menej ako 4 chromatografických krokoch, vrátane zachytávania, medzičistenia a leštenia.

Detaily služby	Operácie jednotky	parametre
Surové čistenie	odstreďovanie	Rýchlosť otáčania, čas
	Vysokotlaková homogenizácia	Celkový obsah pevných látok, tlak, cykly
	Kontinuálna alkalická lýza	Pomer resuspendovaných buniek k lyzačnému roztoku, čas lýzy
	Tangenciálna prietoková filtrácia	Materiál membrány a veľkosť pórov, prietoková rýchlosť transmembránového tlaku (TMP), pomer objemu filtrátu k ploche membrány
	zrážky	Typ a koncentrácia zrážadla, prísada, pH, teplota, čas
Denaturácia a opätovné skladanie	Solubilizácia proteínov inklúznych teliesok	Koncentrácia denaturačného činidla (napr. močovina, guanidín HCl, silný iónový detergent), detergenty (napr. dodecylsulfát sodný, SDS), redukčné činidlá (napr. ditiotreitol, DTT), chelatačné činidlá (kyselina etyléndiamíntetraoctová, EDTA), teplota, čas
Denaturácia a opätovné skladanie	Refolding bielkovín	Metódy refoldingu (riedenie, dialýza alebo SEC refolding), proteínové koncentrácie, pufre, pH, teplota, čas, oxidačné a redukčné činidlá (napr. glutatión, GSH/oxidovaný glutatión, GSSH, DTT/GSSH, cysteín/cystín), aditíva malých molekúl (L-arginín, močovina, guanidín/HCl a detergenty)
Zachytenie, prechodné čistenie a leštenie	AC (afinitná chromatografia)	Niekoľko typov chromatografickej živice/kolóny (napr. AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), dĺžka a priemer kolóny, zloženie pufra, objem vstreku, zloženie mobilnej fázy (adsorpcia a desorpcia), pH, prietok, väzba, Podmienky prania a elúcie.
	IEX (aniónová alebo katexová chromatografia)
	HIC (chromatografia s hydrofóbnou interakciou)
	Odsoľovacia a/alebo veľkostne vylučovacia chromatografia (SEC)
	RPC (chromatografia s reverznou fázou)
	MMC, zmiešaná chromatografia

Prípadová štúdia

Prípad 1

Sme poverení vývojom a optimalizáciou následného purifikačného procesu s cieľom zvýšiť čistotu proteínu z 85 % na 90 % pri súčasnom znížení chromatografických krokov.

Yaohai dodal robustný a škálovateľný purifikačný proces s 3 krokmi chromatografie pre cieľový proteín, bakteriálnu alergiu. A konečná čistota dosiahla 95%.

Prípad 2

Yaohai bol menovaný naším klientom, aby optimalizoval proces odstraňovania endotoxínov z vakcíny s časticami podobnými vírusu (VLP).

Náš tím vykonal optimalizáciu chromatografických parametrov a pripravil liečivú látku s čistotou 98 % a zvyškom endotoxínu 12.8 EU/mg.

Naše skúsenosti

Podieľali sme sa na vývoji a výrobe rôznych veľkých molekúl, vrátane rekombinantných podjednotkových vakcín, VLP, hormónov (inzulín, GLP-1, rastový hormón), cytokínov (interleukín-2/IL-2, IL-15, IL-21 ), rastové faktory (EGF, FGF, NGF), nanobody/jednodoménové protilátky (sdAb), enzýmy atď.

Zariadenia

Používame špičkové systémy AKTA Pure, AKTA Avant a preparatívnu HPLC na vykonávanie rôznych chromatografických metód vrátane afinitnej, iónovej výmeny, hydrofóbnej interakcie, reverznej fázy a vylučovacej chromatografie.

Všetky kategórie

Vývoj následného procesu

Mikrobiálne CDMO