Vlastná syntéza saRNA
Samoamplifikujúca sa mRNA (saRNA), tiež známa ako replikónová RNA, kóduje in vitro transkripčné (IVT) mRNA sekvencie a gény vírusovej replikázy odvodené z alfavírusu alebo flavivírusov. Vírusové replikázové gény umožňujú samoamplifikáciu mRNA, čo vedie k zvýšenej expresii proteínu a minimálnej požadovanej dávke RNA v porovnaní s neamplifikačnými mRNA. Ďalším aspektom je, že saRNA je relatívne veľká molekula (viac ako 14 kb).
Spoločnosť Yaohai Bio-Pharma vytvorila súbor technológií syntézy mRNA na poskytovanie neamplifikačnej mRNA a samoamplifikujúcej sa mRNA (1000 nt~14000 nt), ako je návrh a optimalizácia sekvencie, IVT, purifikácia, lyofilizácia a enkapsulácia lipidových nanočastíc (LNP). . Všetky produkty podliehajú prísnym normám kontroly kvality.
Obr. 1 Štrukturálne znaky IVT mRNA: konvenčná, kruhová a samoamplifikujúca mRNA.
Sekvenčné vlastnosti samoamplifikujúcej mRNA
Samoamplifikujúca sa RNA obsahuje štyri neštrukturálne proteíny (označené ako nsP1, nsP2, nsP3 a nsP4), ktoré sú odvodené od alfavírusov, vírusu venezuelskej konskej encefalitídy (VEEV). Spomedzi nich nsP1 vykazuje duálne enzymatické aktivity, menovite GTázu a N7MTázu, zatiaľ čo nsP2 má RTPázovú aktivitu, ktorá je kľúčová pre zakrytie IVT mRNA, aby sa vytvorila štruktúra Cap 0. Okrem toho nsP2 slúži ako proteáza a helikáza, čo uľahčuje zložité spracovanie celého komplexu nsP. Presná funkcia nsP3 zostáva nepolapiteľná, napriek tomu sa zapája do interakcií s rôznymi proteínmi hostiteľskej bunky, čím prispieva k zoslabeniu antivírusovej odozvy vyvolanej hostiteľom.
Oblasť subgenomického promótora alfavírusu (SGP) je umiestnená pred požadovaným génom (GOI). Element SGP uľahčuje iniciáciu transkripcie GOI obchádzaním čítania sekvencie kódujúcej vírusové nsP proteíny.
Obr. 2 Syntéza a bunkové testy eGFP saRNA platformy Yaohai Bio-Pharma RNASci.
Vlastné riešenia saRNA
Protokol syntézy saRNA je podobný mRNA: Vlastná syntéza mRNA
- Sekvenčný dizajn
- Príprava plazmidovej šablóny
- in vitro transkripcia (IVT)
- mRNA Enzymatic Capping
- mRNA Co-transkripčný capping
- Purifikácia mRNA
- Lyofilizácia mRNA
- Zapuzdrenie LNP
- Analýza a testovanie
SK
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
