zakončenie na 5'-konci je nevyhnutnou úpravou mRNA. mRNA s kapovými štruktúrami, osobitne štruktúrami Cap1, pomáhajú mRNA uniknúť vrozeným imunitným odpovediam in vivo, čo viedie k efektívnemu prekladu bélkov.
Enzymatické zakončenie (dvoukroková metóda) je konvenčnou metódou zakončovania mRNA, podobnou procesu zakončovania u eukaryotických organizmov. Za pôsobenia série enzymov sa 7-metylguanín (m7G) spojí s 5'-koncom mRNA cez väzbu 5'-5' trifosfátu a undergoes methylácii úprave na vytvorenie kapovej štruktúry Cap 1 (m7GpppN).
Schéma vytvárania prirodzených kapových štruktúr
Prúd reakcie enzymatického zakončovania je nasledujúci:
Lineárnymi DNA plazmidmi sa používa ako šablóna pre in vitro transkripciu (IVT) v prítomnosti polymerázy T7, a mRNA s 5' kapovou štruktúrou sa tvorí po jednopásmovej čistiteľnosti pomocou enzymu vaccinia capping enzyme a 2'-O-methyltransferase.
Detaily služieb
Voliteľná služba |
Podrobnosti služby |
Dobový obdobie doručenia (Deň) |
enzymatické uzavretie mRNA |
Enzymatická zakapovacia reakcia |
1 |
Optimalizácia zakapovacej reakcie - voliteľná |
Návrh a optimalizácia komponentov reakcie |
3~7 |
Naše vlastnosti
- Návrh a optimalizácia komponentov zakapovacej reakcie
Komponent zakapovacej reakcie je optimalizovaný a produkcia mRNA transkriptu sa značne zvýši.
- In vitro overenie expresie
Kapónová mRNA je transfekovaná do buniek 293T, a vyjadrenie cieľového proteínu je možné zistiť.
Pomocou prísnej kontroly RNase v experimentálnom prostredí a spotrebičoch je účinne zabránené degradácii mRNA.
Prípadová štúdia<br>
Platforma mRNA spoločnosti Yaohai Bio-Pharma vyvíjala dokonalý proces zakončovania (capping).
Pre eGFP mRNA, preprodukt mRNA pripravený enzymatickým zakončením, môžeme pozorovať signál zelené fluoresecie (eGFP) na vysoké úrovni 24 hodín po transfekcii buniek 293T, čo je detekované pomocou Western Blot (WB), čo demonštruje, že cieľový proteín, zväčšená zelená fluorescenčná proteína (eGFP), sa môže efektívne vyjadrovať in vitro.
Vyjadrenie enzymaticky zakončenej eGFP mRNA v bunke 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
