V porovnaní s dvojstupňovým enzymatickým uzáverom môže jednostupňový ko-transkripčný spôsob uzáveru výrazne znížiť tok procesu. Spôsob je orientovaný na výsledok a zahŕňa pridanie cap analógov do in vitro transkripčnej (IVT) reakcie. Cap analógy môžu byť zavedené na začiatku transkripcie a mRNA so štruktúrou cap môže byť získaná po dokončení transkripcie. Súčasné analógy s uzáverom tretej generácie sa môžu vyhnúť spätnému uzáveru a priamo pridať štruktúru uzáveru 1 k produktu transkripcie.
Čo sa týka imunogenicity mRNA in vivo a účinnosti translácie, proces IVT často prijíma určité druhy modifikovaných NTP a bežné modifikované nukleotidy sú pseudouridín (Ψ), N1-metyl-pseudouridín (N1Ψ) a 5-metylcytozín (5mC) .
Obrázok: Schéma mRNA ko-transkripčnej a cappingovej reakcie
Detaily služby
Služba sa |
Detaily služby |
Dodacia lehota (pracovný deň) |
Ko-transkripčné obmedzenie |
In vitro transkripčná odpoveď (analóg Clean Cap) |
1-2 |
| Nukleotidové modifikácie (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Odstránenie templátu DNA (DNáza I) |
Optimalizácia stavu IVT - voliteľná |
Návrh a optimalizácia reakčných komponentov |
3-7 |
Čo robíme:
- Diverzifikované stratégie modifikácie nukleotidov
Viaceré voliteľné stratégie modifikácie nukleotidov môžu zlepšiť expresiu proteínu.
- Optimalizovaný reakčný systém
Dosiahnite vysoký transkripčný pomer a vysokú účinnosť zakrývania.
- Stabilný proces uzatvárania
Dosiahnite mieru obmedzenia viac ako 95 %.
Účinne predchádzajte degradácii mRNA prísnou kontrolou RNázy v experimentálnom prostredí a spotrebnom materiáli.
Prípadová štúdia
Spoločnosť Yaohai Bio-Pharma vybudovala vyspelú platformu pre proces kotranskripčného uzatvárania s použitím analógov čistých uzáverov na priame pridávanie štruktúry Cap1, pričom sa vyhýba spätnému uzatváraniu. Po štandardizovanej predbežnej úprave vzorky a detekcii kapilárnou elektroforézou (CE) môže miera uzatvárania mRNA zosilneného zeleného fluorescenčného proteínu (eGFP) dosiahnuť viac ako 95 %.
Účinnosť uzatvárania mRNA eGFP viac ako 95 %
eGFP mRNA a mCherry mRNA pripravené ko-transkripčným cappingom sa transfekujú do buniek 293T a po 48 hodinách sa pozoruje silný fluorescenčný signál, čo naznačuje, že mRNA je účinne exprimovaná v bunkách 293T.
Expresia eGFP mRNA a mCherry mRNA v 293T bunke
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
