Kľúčové enzymy na výrobu dlhej RNA
mRNA, ako typ dlho kódovacej RNA, sa bezpečne a účinne prejavila u širšieho počtu ľudí počas pandémie COVID-19. Iné dlhokódovacie RNA, ako samozvyšujúca sa RNA (saRNA) a kruhová mRNA (circRNA), tiež ukázali účinnosť v predklinikálnych a klinikálnych štúdiách.
Veľkomerová výroba dlhej kódovacej RNA závisí od in vitro transkripcie (IVT) pomocou niekoľkých enzymatických reakcií. Kroky výroby RNA zahŕňajú prípravu vzorovej DNA, syntézu IVT RNA, cyklicite, odstránenie DNA, modifikáciu RNA (zatváranie a pridanie chvostu) a čistenie RNA.
Existuje niekoľko kľúčových enzymov používaných pri výrobe dlhej kódovacej RNA (napr. mRNA, saRNA a circRNA), vrátane obmedzovacích endonukleáz, T7 RNA polymerázy (T7 RNAP), inhibítora RNase, anorganskej pyrofosfáty, DNase I, vakíniovej zakrivanocnej enzymy a RNase R.
|
Proces
|
Enzym
|
Funkcia
|
|
Príprava vzorovej DNA
|
Restrikčné endonukleázy
|
Linearizácia plazmidovej DNA (pDNA) na vyhnutie sa vytváraniu dlhšieho transkriptu.
|
|
In vitro transkripcia RNA
|
T7 RNA polymeráza (T7 RNAP)
|
Viazanie na T7 promotor a generovanie špecifického RNA transcriptu; Hrajú kľúčovú úlohu počas reakcie IVT.
|
|
Inhibitor RNazy, rekombinantný
|
Inhibujte aktivitu RNazy počas reakcie IVT.
|
|
Pirofosfataza, inorganická (iPPase)
|
Zabránite tvorbe pirofosfátu počas reakcie in vitro transkripcie (IVT).
|
|
Odstránenie DNA
|
DNase I
|
Odstráňte DNA šablónu.
|
|
Modifikácia RNA
|
Vaccinia uzavirujúci enzym
|
Pridajte Cap1 štruktúry na 5′ koniec IVT mRNA.
|
|
2’-O-Methyltransferáza
|
| bohatenie circRNA |
RNase R |
Degradujte lineárnu RNA a obohatte cirkuлярnú RNA. |
Yaohai Bio-Pharma ponúka kompletné CDMO riešenie pre enzymy
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
