In vitro sinteza mRNA
Glavne komponente mRNA su 5'-cap, 5'-UTR, otvoreni okvir za čitanje (ORF), 5'-UTR i 5' poli A rep, koji su bitni za održavanje funkcije mRNA. Istraživači su koristili različite metode za identifikaciju i optimizaciju sekvenci i struktura mRNA.
Sinteza mRNA izvodi se na temelju in vitro transkripta (IVT) pomoću linearnih DNA šablona, RNA polimeraza (T3, T7 ili SP6), nemodificiranih ili modificiranih nukleotida, enzima i odgovarajućih reagensa.
Modifikacija 5' kapice
Sekvence zrele mRNA iz eukariocita pokazuju 7-metilguanozin (m7G) kapu na 5' kraju, što poboljšava stabilnost mRNA i učinkovitost translacije. Postoje dvije opće metode za hvatanje mRNA in vitro. Prvo, mRNA se može zatvoriti zajedno s in vitro transkriptom dodavanjem cap analoga strukture m7GpppG (npr. CleanCap) u IVT sustav. Ova ko-transkripcijska metoda zatvaranja osigurava prirodnu strukturu kapsule od 5' i povećava učinkovitost zatvaranja na gotovo 90-99%. Drugo, mapiranje mRNA također se može postići mapiranjem enzimskih reakcija nakon in vitro reakcije transkripcije.
Modifikacija PolyA
Poly(A) rep također produljuje poluživot mRNA in vivo i poboljšava učinkovitost translacije mRNA. Duljina amplificiranog poli(A) repa trebala bi biti 100-300 nukleotida. Dodatno, modificirani adenozin povećava stabilnost poli A repa protiv stanične degradacije RNaze. Poli A rep može se umetnuti in vitro transkripcijom pomoću DNK predloška koji kodira poli A, što rezultira specifičnom dužinom poli A sekvence. Rekombinantna poli A polimeraza također se može koristiti enzimskom poliadenilacijom nakon transkripcije mRNA.
Modifikacija nukleotida
Modificirani nukleozidi mogu inhibirati prepoznavanje i/ili aktivaciju receptora za prepoznavanje uzorka (PRR) i poboljšati učinkovitost mRNA cjepiva na dva potpuno različita načina. Dodatak određenih kemijski modificiranih nukleozida, uključujući pseudouridin (ψ), 1-metilpseudouridin (m1ψ), tiouridin (s4U) i 5-metilcitozin (m5C) može spriječiti aktivaciju TLR7/8 i drugih urođenih imunoloških receptora, koji značajno smanjuju imunogenost mRNA.
Sustav dostave mRNA
Da bi održala funkciju mRNA, ona mora ući u citoplazmu domaćina i eksprimirati specifične antigene. Jedan od najtežih izazova s kojima se suočavaju mRNA cjepiva i terapeutici leži u isporuci mRNA u ciljne stanice s dovoljno visokim razinama translacije jer zahtijeva visoko specifične i učinkovite sustave za isporuku mRNA. Razvijeno je i korišteno nekoliko vektora za dostavu mRNA, uključujući dendritične stanice (DC), protamin, kationske polimere i kationske liposome.
Kompleksi kationskih lipida s mRNA i drugim pripravcima mogu zajedno tvoriti nanočestice veličine 80-200 nm koje se nazivaju lipidne nanočestice (LNP). Kao jedan od najnaprednijih sustava za dostavu mRNA, LNP uključuje ionizirajuće kationske lipide, prirodne fosfolipide, kolesterol i polietilen glikol (PEG). Nekoliko RNA cjepiva i terapija (siRNA i mRNA) koje je odobrila Uprava za hranu i lijekove SAD-a temelje se na LNP sustavima isporuke.
Yaohai Bio-Pharma nudi sveobuhvatno rješenje za RNA
|
Katalog RNA proizvoda
- Katalog mRNA proizvoda
- Katalog saRNA Proizvodi
- Katalog circRNA proizvoda
|
Prilagođena sinteza RNK
- Prilagođena sinteza mRNA
- Prilagođena sinteza saRNA
- Prilagođena sinteza circRNA
|
mRNA CDMO usluge
- Razvoj procesa
- GMP proizvodnja
- Aseptično punjenje i završna obrada
- Analiza i testiranje
|
Isporučivi proizvodi po narudžbi
|
Razred
|
isporučeno
|
Specifikacija
|
Aplikacije
|
|
ne-GMP
|
Ljekovita tvar, mRNA
|
0.1~10 mg (mRNA)
|
Pretklinička istraživanja kao što su transfekcija stanica, razvoj analitičke metode, predstabilne studije, razvoj formulacije
|
|
Lijek, LNP-mRNA
|
|
GMP, sterilnost
|
Ljekovita tvar, mRNA
|
10 mg ~ 70 g
|
Istraživački novi lijek (IND), odobrenje za kliničko ispitivanje (CTA), opskrba kliničkim ispitivanjima, zahtjev za licencu za biološki lijek (BLA), komercijalna opskrba
|
|
Lijek, LNP-mRNA
|
5000 bočica ili napunjenih štrcaljki/patrona
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
