In vitro sinteza mRNA
Glavni sastojci mRNA su 5’-kap, 5’-UTR, otvoreni čitački okvir (ORF), 5’-UTR i 5’ poli A rep, koji su nužni za održavanje funkcije mRNA. Istraživači su koristili različite metode za identifikaciju i optimizaciju mRNA nizova i struktura.
Sintezu mRNA obavlja se na temelju in vitro transkripcije (IVT) pomoću linearnih DNA šabloni, RNA polymeraza (T3, T7 ili SP6), neizmijenjenih ili izmijenjenih nukleotida, enzima i odgovarajućih sredstava.
modifikacija 5’ Kap
Sekvenca zrelog mRNA iz eukariotske stanice prikazuje 7-metilguanosinovu (m7G) kapicu na 5' kraju, što poboljšava stabilnost mRNA i učinkovitost prijevoda. Postoje dvije opće metode za uhvaćanje mRNA in vitro. Prvo, mRNA može biti zakapičena zajedno s transkriptom in vitro dodavanjem kap analoga m7GpppG strukture (npr., CleanCap) u IVT sustav. Ova metodologija ko-transkripcijskog zakapičenja pruža prirodnu 5' kapsnu strukturu i povećava učinkovitost zakapičenja skoro do 90-99%. Drugo, mapiranje mRNA-ja također se može izvesti putem enzimatskih reakcija nakon transkripcije in vitro.
PolyA Modifikacija
Poly(A) repče također produžuje polovicu života mRNA in vivo i poboljšava učinkovitost prijevoda mRNA. Duljina pojačanog poly(A) repa treba biti 100-300 nukleotida. Također, modifikovani adenosin povećava stabilnost poly A repa protiv degradacije staničnim RNazima. Poly A rep se može umetnuti in vitro transkripcijom pomoću DNA šablon koja kodira poly A, čime nastaje specifična duljina poly A redoslijeda. Može se također koristiti rekombinantna poly A polymeraza za enzimatsku poliadenilaciju nakon transkripcije mRNA.
Modifikacija nukleotida
Modificirani nukleozidi mogu inhibirati prepoznavanje i/ili aktivaciju receptora za prepoznavanje uzoraka (PRR) te poboljšati učinkovitost mRNA cjepiva na dva potpuno različita načina. Dodavanje određenih hemijski modificiranih nukleozida, uključujući pseudouridin (ψ), 1-metilpseudouridin (m1ψ), tiouridin (s4U) i 5-metilcitozin (m5C), može sprečiti aktivaciju TLR7/8 i drugih imunoloških receptora, što značajno smanjuje imunogenostnost mRNA.
sustav dostave mRNA
Da bi se održala funkcija mRNA, mora unijeti u citozolu domaćeg stanice i izraziti specifične antigene. Jedan od najtežih izazova koji stojite pred mRNA cjepivima i terapijama nalazi se u dostavi mRNA u ciljane stanice s dovoljno visokim razinama prijevođenja, što zahtjeva vrlo specifične i učinkovite sustave za dostavu mRNA. Razvijeno je nekoliko vektora za dostavu mRNA, uključujući dendritne stanice (DCs), protamin, kationski polimeri i kationske liposome.
Kompleksi kationih lipida s mRNA i drugim pripravcima mogu zajedno obrazovati 80-200 nm veličine nanoparticule koje se nazivaju lipidne nanoparticule (LNP). Kao jedan od najnaprednijih sustava za dostavu mRNA, LNP uključuje ionizabilne katione lipide, prirodne fosfolipide, holesterol i polietilen glikol (PEG). Nekoliko RNA cjepiva i terapija (siRNA i mRNA) koje je odobrio U.S. Food and Drug Administration temelji se na sustavima dostave LNP.
Yaohai Bio-Pharma Ponudi Jedinu Rešenja za RNA
|
Katalog RNA proizvoda
- Katalog mRNA proizvoda
- Katalog saRNA proizvoda
- Katalog cirkularnih RNA proizvoda
|
Prilagođena sinteza RNA
- Prilagođena sinteza mRNA
- Prilagođena saRNA sinteza
- Prilagođena circRNA sinteza
|
mRNA CDMO usluge
- Razvoj Procesa
- Proizvodnja prema GMP
- Sterilno ispunjavanje i završna obrada
- Analiza i testiranje
|
Prilagođeni Dostavljeni Proizvodi
|
Razred
|
Isporučivi
|
Specifikacija
|
Prijave
|
|
ne-GMP
|
Lijekoviti tvar, mRNA
|
0,1~10 mg (mRNA)
|
Preklinička istraživanja kao što su transfekcija stanica, Razvoj analitičkih metoda, Pre-stabilnost studije, Razvoj formulacije
|
|
Lijekoviti proizvod, LNP-mRNA
|
|
GMP, Sterilnost
|
Lijekoviti tvar, mRNA
|
10 mg~70 g
|
Zahtjev za novim lijekom (IND), Ovlaštenje za kliničke ispite (CTA), Potpora za kliničke ispite, Zahtjev za licencu biološkog proizvoda (BLA), Trgovačka potpora
|
|
Lijekoviti proizvod, LNP-mRNA
|
5000 flašića ili prenapunjene šprice/ kartuše
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
