Kružni mRNA (circRNA) široko se koristi u proučavanju funkcija gena ili proteina. Također je popularan u razvoju preventivnih i liječnih bioloških sredstava, slično mRNA.
Yaohai Bio-Pharma je uspostavila seriju tehnologija za sintezu circRNA kako bi pružila visokokvalitetnu RNA, poput dizajna i optimizacije niza, tranскripcije in vitro (IVT), cirkularizacije, očišćavanja i enkapsulacije lipidnim nanoparticulama (LNP). Sva proizvodnja se oslobađa pod strognim standardima kontrole kvalitete (QC).
U usporedbi s linearnom mRNA, cirkularna RNA (circRNA) je strukturno stabilnija i predstavlja glavni točku u trenutnom istraživanju lekova na temelju nukleinsih kiselina. Ima širok spektar primjena u različitim područjima, bilo da je kodirajuća circRNA ili nekodirajuća circRNA, uključujući preventivne cjepive za zarazne bolesti, terapijske onkološke cjepive, terapijske onkološke lijekove, proteinski zamjenski terapiju, regenerativnu medicinu, terapiju stanica i gena (CGT), ulogu molekulske spone i RNA aptamere.
Proces | Opcionalna usluga | Detalji usluge | Rok isporuke (Dan) |
dizajn i optimizacija sekvence circRNA | Dizajn i optimizacija kodirajućih nizova | Optimizacija kodona CDS | 1 |
Dizajn i optimizacija nekodirajućih nizova | Dizajn i optimizacija intronskih i eksonske sekvenci, homološnih ruku i spacera | 1-2 | |
Priprema cirkularnog plazmida | Sinteza gene | Sinteza Geneova (Trece strane) | 7-10 |
Uvećanje Plazmida | Uvećanje Plazmida | 2 | |
Izlučivanje Plazmida | |||
Priprema Linearnog Plazmida | Linearizacija i očišćenje plazmida | Linearnizacija plazmida | 1 |
Ciscenje Linearnog DNA-a | |||
Transkripcija in Vitro i Ciklizacija | Transkripcija in Vitro i Ciklizacija | Reakcije Transkripcije in Vitro i Ciklizacije | 1-2 |
Dijagnoza s RNase R | |||
Optimizacija - opcionalno | Sastav Reakcije, Optimizacija Vremena | 2-5 | |
circRNA čišćenje | Konvencionalna Metoda Čišćenja | Precipitiranje litijem cloridom | 1 |
Čišćenje hladnim česticama | 1 | ||
Visoko Čisto circRNA Čišćenje | Preparativna Visoke Performanse Likvidna Hromatografija (HPLC) | 1-2 | |
Zamjena bufera | Ultrafiltracija | 1 | |
circRNA liofilizacija | Ispunjavanje Uzorka | Punjenje | 2-3 |
Liofilizacija | Prethodno zamičivanje | ||
Prva sušenja (sublimacija) | |||
Druga sušenja (dezorpcija) | |||
circRNA-LNP Encapsulation | LNP inkapsulacija | Obrada materijala i tečnosti | 2 |
Mikrofluidna uređaja mešanja | |||
Zamjena bufera | Tangencijalna toka filtracije | 1 | |
Sterilizirano | Filtriranje | ||
Kontrola kvalitete plazmidnog DNA | Koncentracija/čistota | Ultravijoletna (UV) spektrofotometrija | 1-2 |
Plazmidna konformacija | Elektroforeza na agarosnom geлу (AGE) | ||
Kapilarna elektroforeza (CE) - opcionalno | |||
Identifikacija plazmida | Identifikacija restrikcijskog enzima/AGE | ||
Kontrola kvalitete circRNA | Koncentracija/čistota | Ultravijoletna (UV) spektrofotometrija | - |
Čistoća | Elektroforeza u gelu od agarosa (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC - opcionalno | 1 | ||
Kontrola kvaliteta circRNA-LNP | Učinkovitost inkapsulacije | RiboGreen metoda | 1 |
Veličina čestica | Dinamičko rasipanje svjetlosti (DLS) | 1 | |
Indeks polidispersnosti | Dinamičko rasipanje svjetlosti (DLS) | 1 | |
Zeta potencijal | Dinamičko rasipanje svjetlosti (DLS) | 1 | |
Celanjski test jačine | Celanjska transfekcija | Postavljanje celija, celanska transfekcija | 4 |
Otkrivanje ciljne proteine | Fluorescentna promatranja, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Transfekcirali smo ujačenu zelenu fluorescentsku proteinski cirkularni RNA (eGFP circRNA), mČeriveni circRNA, luciferazu circRNA u 293T celije i otkrili smo ciljni protein kroz fluorescenciju, svjetlosni ili bojni signal, western blot (WB), enzimno-vezani imunossaj (ELISA).
Celanjski testovi jačine uzoraka circRNA od Yaohai Bio-Pharma