Kružna mRNA (circRNA) naširoko se koristi u proučavanju funkcija gena ili proteina. U međuvremenu, popularan je u razvoju profilaktičkih i terapijskih bioloških lijekova, slično mRNA.
Yaohai Bio-Pharma uspostavila je skup tehnologija sinteze circRNA za pružanje visokokvalitetne RNA, kao što je dizajn sekvence i optimizacija, in vitro transkripcija (IVT), cirkularizacija/ciklizacija, pročišćavanje i enkapsulacija lipidnih nanočestica (LNP). Svi proizvodi puštaju se u promet prema strogim standardima kontrole kvalitete (QC).
U usporedbi s linearnom mRNA, kružna RNA (circRNA) je stabilnije strukture i glavna je vruća točka u trenutnom istraživanju lijekova nukleinske kiseline. Ima širok raspon primjena u različitim područjima, bilo kao kodirajuća circRNA ili nekodirajuća circRNA, uključujući profilaktička cjepiva za zarazne bolesti, terapeutska onkološka cjepiva, terapeutske onkološke lijekove, nadomjesnu terapiju proteina, regenerativnu medicinu, staničnu i gensku terapiju (CGT) , molekularna uloga spužve i RNA aptamer.
Proces | Dodatna usluga | Pojedinosti usluge | Razdoblje isporuke (dan) |
Dizajn i optimizacija sekvence circRNA | Dizajn i optimizacija sekvenci kodiranja | Optimizacija CDS kodona | 1 |
Dizajn i optimizacija nekodirajućih nizova | Sekvenca introna i egzona, dizajn i optimizacija homolognog kraka i razmaknice | 1-2 | |
Priprava kružnog plazmida | Sinteza gena | Sinteza gena (treća strana) | 7-10 |
Amplifikacija plazmida | Amplifikacija plazmida | 2 | |
Ekstrakcija plazmida | |||
Linearizirana priprema plazmida | Linearizacija i pročišćavanje plazmida | Linearizacija plazmida | 1 |
Linearizacija pročišćavanja DNK | |||
In vitro transkripcija i ciklizacija | In vitro transkripcija i ciklizacija | In vitro reakcije transkripcije i ciklizacije | 1-2 |
RNaza R Probava | |||
Optimizacija-opcionalno | Sastav reakcije, optimizacija vremena | 2-5 | |
pročišćavanje circRNA | Konvencionalna metoda pročišćavanja | Taloženje litijeva klorida | 1 |
Pročišćavanje magnetskim kuglicama | 1 | ||
Visoko čista circRNA pročišćavanje | Preparativna tekućinska kromatografija visoke učinkovitosti (HPLC) | 1-2 | |
Razmjena međuspremnika | ultrafiltracija | 1 | |
liofilizacija circRNA | Ispuna uzorka | Ispunjavanje | 2-3 |
Liofilizacija | Prethodno zamrzavanje | ||
Primarno sušenje (sublimacija) | |||
Sekundarno sušenje (desorpcija) | |||
circRNA-LNP enkapsulacija | LNP enkapsulacija | Predobrada materijala i tekućine | 2 |
Miješanje mikrofluidnih uređaja | |||
Razmjena međuspremnika | Tangencijalna filtracija protoka | 1 | |
sterilizirati | Filtracija | ||
Kontrola kvalitete plazmidske DNA | Koncentracija/čistoća | Ultraljubičasta (UV) spektrofotometrija | 1-2 |
Konformacija plazmida | Elektroforeza u agaroznom gelu (AGE) | ||
Kapilarna elektroforeza (CE) - izborno | |||
Identifikacija plazmida | Identifikacija restrikcijskog enzima/AGE | ||
Kontrola kvalitete circRNA | Koncentracija/čistoća | Ultraljubičasta (UV) spektrofotometrija | - |
Čistoća | Elektroforeza u agaroznom gelu (AGE)/E-gel | 0.5 | |
HPLC-izborno | 1 | ||
Kontrola kvalitete circRNA-LNP | Učinkovitost enkapsulacije | RiboGreen metoda | 1 |
Veličina čestice | Dinamičko raspršenje svjetlosti (DLS) | 1 | |
Indeks polidisperznosti | Dinamičko raspršenje svjetlosti (DLS) | 1 | |
Zeta Potencijal | Dinamičko raspršenje svjetlosti (DLS) | 1 | |
Test potencije na bazi stanica | Transfekcija stanica | Postavljanje stanica, transfekcija stanica | 4 |
Detekcija ciljnog proteina | Promatranje fluorescencije, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Transficirali smo poboljšanu circRNA zelenog fluorescentnog proteina (eGFP circRNA), mCherry circRNA, circRNA luciferaze u 293T stanice i detektirali ciljni protein fluorescentnim, luminescentnim ili signalom u boji, western blotom (WB), enzimski imunoanalizom (ELISA).
Stanični testovi potencije uzoraka circRNA Yaohai Bio-Pharma