U vezi s izradom serije prethodnika RNA, često korištena metoda je transkripcija in vitro (IVT). Reakcija IVT koristi linearizirani plazmidni DNA koji sadrži T7 promotor kao šablon i sintetizira prethodnik RNA uz korištenje nukleotidskih trifosfata (NTPs) kao subustrata u prisutnosti T7 RNA polimeraze.
Metode ciklizacije in vitro uključuju hemijsku ligaciju, enzimsku ligaciju i metodu permutiranog introna-eksona (PIE). Hemijska ligacija i enzimska ligacija prilagodljive su za ciklizaciju kraćih RNA. Kada je odlomak veći od 100 nt, brzina ciklizacije znatno će se smanjiti. U suprotnosti, metoda bazirana na sustavu PIE može postići ciklizaciju nizova od 8 kb.
Pod katalizom guanozin trifosfata (GTP), PIE struktura podvrgava ciklizaciji sekvence izvan introna. U kombinaciji s razumnim pristupom za povećanje brzine ciklizacije, Yaohai Bio-Pharma može postići ciklizaciju sekvena duljine do 4 kb, s učinkovitosti ciklizacije veće od 80%.
In vitro ciklizacijska reakcija RNA protiče na sljedeći način:
Prethodnik RNA sintetiziran je in vitro transkripcijom, a PIE komponenta završi samospajanje pod katalizom GTP kako bi se formirao circRNA.
Detalji usluga
| Proces |
Detalji usluge |
Rok Izrade (radni dan) |
| Transkripcija in vitro i cirkulacija |
Potvrda reakcijskog sustava |
1-2 |
| Reakcije Transkripcije in Vitro i Ciklizacije |
| Dijagnoza s RNase R |
| Optimizacija reakcije |
Sastav Reakcije, Optimizacija Vremena |
2-5 |
Naše značajke
- Strog dizajn i optimizacija testa
Postignuta može biti ciklizacija RNK do 4 kb.
- Visoka učinkovitost ciklizacije
Kroz racionalnu strategiju optimizacije niza može se postići stopa ciklizacije veća od 80%.
Putem stroge kontrole RNasija u eksperimentalnom okruženju i potrošnji, učinkovito se sprečava degradacija RNA.
Studija slučaja
In vitro ciklizacija i obogatavanje circRNA
Na temelju PIE sustava, Yaohai Bio-Pharma je optimizirao niz circRNA, s stopom ciklizacije većom od 80% prema agaroznoj gel elektroforezi (AGE). Korištenjem RNazae R za obogatavanje circRNA, rezultati E-gel elektroforeze pokazuju da se linearni RNK prethodnik raspušta, a nakon daljnje čišćenja, većina šupljih circRNA može biti uklonjena. Rješenje za čišćenje je samoodrživo razvijeno od strane Yaohai Bio-Pharma.
In vitro cirkulacija i obogatavanje circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
