5'-end capping bitna je modifikacija mRNA. mRNA s cap strukturama, posebno Cap1 strukturama, olakšavaju mRNA izbjegavanje urođenih imunoloških odgovora in vivo, što rezultira učinkovitom translacijom proteina.
Enzimsko zatvaranje (metoda u dva koraka) je konvencionalna metoda zatvaranja mRNA, slično procesu zatvaranja u eukariotskim organizmima. Pod djelovanjem niza enzima, 7-metilgvanin (m7G) je vezan na 5'-kraj mRNA preko 5'-5' trifosfatne veze i podvrgava se metilacijskoj modifikaciji da bi se formirala kapa struktura Cap 1 (m7GpppN).
Dijagram formiranja prirodne strukture kape
Tok reakcije enzimatskog zatvaranja je sljedeći:
Linearizirana plazmidna DNA koristi se kao predložak za in vitro transkripciju (IVT) u prisutnosti T7 polimeraze, a mRNA sa 5' end-cap strukturom se formira nakon pročišćavanja u jednom koraku pomoću enzima za zatvaranje vakcinije i 2'-O -metiltransferaza.
Pojedinosti o uslugama
Dodatna usluga |
Pojedinosti usluge |
Razdoblje isporuke (dan) |
enzimsko zatvaranje mRNA |
Enzimska reakcija zatvaranja |
1 |
Optimizacija reakcije zatvaranja - izborno |
Projektiranje i optimizacija reakcijskih komponenti |
3 ~ 7 |
Naše značajke
- Dizajn i optimizacija komponente reakcije zatvaranja
Komponenta reakcije zatvaranja je optimizirana, a proizvodnja mRNA transkripta znatno je povećana.
- Verifikacija ekspresije in vitro
Zatvorena mRNA transfektira se u 293T stanice i može se otkriti ekspresija ciljnog proteina.
Kroz strogu kontrolu RNaseson eksperimentalnog okruženja i potrošnog materijala, degradacija mRNA je učinkovito spriječena.
Case study
Platforma mRNA tvrtke Yaohai Bio-Pharma izgradila je savršeni proces reakcije zatvaranja.
Za eGFP mRNA, mRNA pre-proizvod pripremljen enzimskim zatvaranjem, eGFP fluorescencijski signal (zelena fluorescencija) na visokoj razini može se uočiti nakon transfekcije 293T stanica tijekom 24 sata, što se detektira Western Blotom (WB), pokazujući da je ciljni protein poboljšani zeleni fluorescentni protein (eGFP) može se učinkovito eksprimirati in vitro.
Ekspresija enzimski zatvorene eGFP mRNA u 293T stanici
HR
EN
AR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
