Značaj razvoja nizvodnog procesa (DSP).
Cijela fermentacijska smjesa sadrži ciljni protein ili plazmid, kao i nečistoće povezane s proizvodom i procesom, npr. agregate, supstrate mikrobnih stanica, proteine stanica domaćina (HCP), DNK stanice domaćina (HCD), endotoksin i antibiotike.
Stoga je ključno dizajnirati učinkovit DSP, proces pročišćavanja, kako bi se uklonile određene nečistoće i proizvela visoko pročišćena i visokokvalitetna ljekovita tvar. Dodatno, optimizacija procesa pročišćavanja može pomoći u povećanju povrata proizvoda, smanjenju troškova i poboljšanju skalabilnosti i ponovljivosti procesa.
Ključne riječi: razvoj procesa, optimizacija i validacija, proces pročišćavanja, kromatografija, eliminacija nečistoća, uklanjanje HCP, eliminacija HCD, uklanjanje endotoksina, denaturacija i ponovno savijanje proteina, sklapanje VLP, konjugacija
Primjena: Biofarmaceutska industrija, humana medicina, medicina za životinje, cjepiva, rekombinantni biološki lijekovi velikih molekula, rekombinantni biološki lijekovi, biološki reagens
DSP rješenja tvrtke Yaohai Bio-Pharma
Imamo veliko iskustvo u izolaciji ciljanih proteina ili plazmida iz složenih matrica razvojem i optimiziranjem procesa pročišćavanja nizvodno. Postoje različite vrste jediničnih operacija prikladnih za pročišćavanje bioloških lijekova, uključujući centrifugiranje, filtraciju, homogenizaciju, alkalnu lizu, ultrafiltraciju, taloženje, denaturaciju i ponovno presavijanje proteina, kromatografiju itd.
Naše dostupne usluge razvoja pročišćavanja uključuju:
- Razvoj cjelokupnog procesa pročišćavanja od prikupljanja stanica ili supernatanta do konačnog aktivnog sastojka.
- Optimizacija procesa pročišćavanja na temelju proizvoda i nečistoća povezanih s procesom za povećanje kvalitete i sigurnosti proizvoda, npr. HCP, HCD, endotoksin.
- Definicija i optimizacija ključnih parametara u jednoj ili nekoliko operacija jedinice, uključujući staničnu lizu, tangencijalnu filtraciju protoka, probir smole, kromatografiju, denaturaciju proteina i ponovno savijanje, itd.
- Optimizacija procesa u smislu kvalitete, prinosa, povrata, troškova i skalabilnosti.
- Validacija nizvodnog procesa pročišćavanja.
- Procjena raspona parametara temeljena na riziku i dizajn eksperimenata (DoE) u modeliranju procesa.
Pojedinosti usluge
Standardizirane platforme za pročišćavanje proteina ili plazmida temelje se na više grubih koraka pročišćavanja i manje od 4 kromatografska koraka, uključujući hvatanje, srednje pročišćavanje i poliranje.
| Pojedinosti usluge |
Operacije jedinice |
Parametri |
| Grubo pročišćavanje |
centrifugiranje |
Brzina rotacije, vrijeme |
| Homogenizacija pod visokim pritiskom |
Ukupni sadržaj čvrste tvari, tlak, ciklusi |
| Kontinuirana alkalna liza |
Omjer resuspendiranih stanica i otopine za lizu, vrijeme lize |
| Tangencijalna filtracija protoka |
Materijal membrane i veličina pora, brzina protoka hrane, transmembranski tlak (TMP), omjer volumena filtrata i površine membrane |
| Taloženje |
Tip i koncentracija taložnika, aditiv, pH, temperatura, vrijeme |
| Denaturacija i presavijanje |
Solubilizacija proteina inkluzijskog tijela |
Koncentracija denaturanta (npr. urea, gvanidin HCl, jaki ionski deterdžent), deterdženti (npr. natrijev dodecil sulfat, SDS), redukcijski agensi (npr. ditiotreitol, DTT), kelirajući agensi (etilendiamintetraoctena kiselina, EDTA), temperatura, vrijeme |
| Ponovno savijanje proteina |
Metode ponovnog savijanja (razrjeđivanje, dijaliza ili SEC ponovno savijanje), koncentracije proteina, puferi, pH, temperatura, vrijeme, oksidirajući i redukcijski agensi (npr. glutation, GSH/oksidirani glutation, GSSH, DTT/GSSH, cistein/cistin), aditivi malih molekula (L-arginin, urea, gvanidin/HCl i deterdženti) |
| Hvatanje, srednje pročišćavanje i poliranje |
AC (afinitetna kromatografija) |
Nekoliko vrsta kromatografskih smola/kolona (npr. AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), duljina i promjer kolone, sastav pufera, volumen injekcije, sastav mobilne faze (adsorpcija i desorpcija), pH, brzina protoka, vezivanje, Uvjeti ispiranja i eluiranja. |
| IEX (anionska ili kationska kromatografija) |
| HIC (Hidrofobna interakcijska kromatografija) |
| Odsoljavanje i/ili kromatografija za isključivanje veličine (SEC) |
| RPC (kromatografija reverzne faze) |
| MMC, mješovita kromatografija |
Case study
Slučaj 1
Dobili smo zadatak da razvijemo i optimiziramo daljnji proces pročišćavanja kako bismo povećali čistoću proteina s 85% na 90% uz smanjenje koraka kromatografije.
Yaohai je isporučio robustan i skalabilan proces pročišćavanja s 3 koraka kromatografije za ciljni protein, bakterijsku alergiju. I konačna čistoća dosegla je 95%.
Slučaj 2
Yaohai je imenovan od strane našeg klijenta da optimizira proces uklanjanja endotoksina cjepiva protiv čestica sličnih virusu (VLP).
Naš tim je izvršio optimizaciju parametara kromatografije i pripremio ljekovitu tvar čistoće 98% i ostatka endotoksina 12.8EU/mg.
Naša iskustva
- Sudjelovali smo u razvoju i proizvodnji raznih velikih molekula, uključujući rekombinantna podjedinična cjepiva, VLP, hormone (inzulin, GLP-1, hormon rasta), citokine (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21) ), čimbenici rasta (EGF, FGF, NGF), nanotijela/protutijela s jednom domenom (sdAbs), enzimi itd.
Oprema
Koristimo vodeće u industriji AKTA Pure, AKTA Avant i preparativne HPLC sustave za izvedbu različitih kromatografskih metoda uključujući afinitetnu, ionsku izmjenu, hidrofobnu interakciju, reverznu fazu i kromatografiju isključenja veličine.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
