Zauzetost N-glikozilacijskog mjesta je fiziološka karakteristika glikoproteina i glavnina proizvodi N-glikan. Usluga za analizu zauzetosti N-glikozilacijskog mjesta od strane Yaohai Bio-Pharma se provodi preko štampanja, otpuštanja, obojavanja i analize pomoću tečne kromatografije-elektrosprajz masenske spektroskopije/masenske spektroskopije (LC-ESI-MS/MS).
Bili smo angažirani u karakterizaciji strukture proteina različitih velikih molekula, uključujući Rekombinantne Podjedinične Cijepe, Nanotijele/VHHs/Jednodomene Antitijela (sdAbs), Odlomke Antitijela, Hormone/Peptidi, Cytokine, Rastni Faktori (GF), Enzime, Kolačaste Tkanine itd.
Uredbene zahtjeve za zauzetost N-glikozilacijskog mjesta
Prema smjernici ICH Q6B, „za glikoproteine određuje se šećerne sadržaj (neutralni šećeri, aminoshećeri i sijalične kiseline). Nadalje, analizira se struktura šećernih lanaca, uzorak oligoshećera (antenski profil) i mjesto glikozacije polipeptidskog lanca u najvećem mogućem obimu.“
Analitička metoda
| Analiza |
Metode |
| Zauzetost lokacije N-glikozilacije |
LC-MS nakon deglikozilazne i proteazne digerzije |
Postupci
1. Digerzija proteina za stvaranje malih peptidskih fragmenata.
2. Oslobađanje N-glikana pomoću endoglikozidaza H ili PNGase F. Endoglikozidaza H prelomi činjenicu između dvaju GlcNAc restova u jezgru N-povezanih glikana, dok PNGase F bila je glicoamidaza koja prelomi vezu između GlcNAc i Asn, oslobađajući cijeli šećerni lanac i pretvara Asn u Asp s masnim povećanjem od 1-Da.
3. Oboganje N-glikopeptida putem HILIC (Hidrofilna interakcijska tekućinska kromatografija)
4. Analiza zauzetosti N-povezanih glikozacijnih mjesta pomoću LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
